[发明专利]靶向于组织因子基因的小核酸及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及靶向于组织因子基因的小核酸的新用途，具体涉及在治疗眼底新生血管相关性疾病中的应用，尤其是治疗年龄相关性黄斑变性、糖尿病视网膜病变等由新生血管异常增生引起的眼病。所述小核酸是治疗眼底新生血管相关性疾病的药物中的活性成分。

背景技术

小干扰核酸（small interfering RNA，siRNA）是带有特定基因密码的短小核酸碱基片断，一般功能长度为21～23bp。其作用原理是：与特定靶基因mRNA结合，使之降解而失去功能。这种双链RNA分子介导的高效转录的基因沉默现象称之为核酸干扰（RNA interference，RNAi），双链RNA进入细胞内先与细胞内的其他成分结合成一个核酸复合体，从而形成RNA诱导沉默复合体（RNA induced silencing complex，RISC）；激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA上并切割而导致mRNA降解，从而清除细胞内特定的基因表达。siRNA不仅广泛应用于生物医学研究，而且可利用其对致病基因的高效特异性抑制的特性设计药物。

微小RNA（microRNA，miRNA）是调节基因表达的21～23个核苷酸长度的单链RNA分子。miRNA是由DNA转录的基因编码，但不翻译成蛋白质的非编码RNA；miRNA形成过程是由称做pri-miRNA原始转录本加工成pre-miRNA的短茎环结构，其作用途径与siRNA相同，pre-miRNA经Dicer酶切割后形成miRNA，进入RISC，通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。研究表明miRNA参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。成熟的miRNA分子部分互补到一个或多个mRNA分子，它们的主要功能是下调基因的表达。

年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration，AMD）是50岁以上的人视力损害的主要原因之一。发达国家的60岁以上人群发病率在10%以上。随着中国人口老年化，该病的发病率有上升趋势。AMD病变发生在视网膜的黄斑区。在临床上分为干性和湿性两型，干性主要由视网膜细胞凋亡引起，表现为视网膜地图样萎缩。病程发展慢但不可逆。湿性的病理特征为脉络膜新生血管（choroid neovascularization，CNV）伴有大量渗出，病程发展快，但有效抑制脉络膜新生血管可在一定程度上改善视力。该病早期的病理变化为视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial cells，RPE）功能受损，细胞外基质积聚导致Bruch膜增厚和玻璃膜疣形成。目前认为AMD的发病机制为氧化应激、炎症反应和免疫反应。在特定的致病因子方面，血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在促进湿性AMD的CNV形成上起关键作用。

干性AMD目前基本无特异治疗方法。湿性AMD治疗主要针对脉络膜新生血管。传统的疗法有激光光凝，光动力疗法，手术和放射。但疗效不佳。基因泰克公司2005年成功开发出二种抗VEGF抗体，Avastin和Lucentis后，湿性AMD治疗发生了很大的改观。Lucentis以AMD为适应症。Avastin是美国FDA批准用于直肠癌的药物，适应症并不包括AMD。但由于其结构与Lucentis相似并且价格便宜也在临床上广泛使用。这两种抗VEGF抗体球内注射可减缓相当部分患者的疾病进展及部分改善视力。抗VEGF一直是AMD眼药的开发的主要思路。在siRNA方面，可表达VEGF短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）腺病毒载体可有效抑制VEGF诱导小鼠CNV。小鼠玻璃体腔注射后可有效地沉默高水平的VEGF，从而阻止CNV的形成（Cashman SM等人. IOVS, 2006;47:3496-3504）。然而近年来发现VEGF除了病理性地促进CNV的形成外，还有很强的针对非血管细胞的生理性功能。VEGF通过激活VEGF受体2对视网膜节细胞有直接保护作用（Nishijima K等人: Am J Pathol. 2007;171:53-67）。离体试验也发现VEGF可减少视网膜节细胞在氧化应激时的损伤。如加入Avastin，VEGF的这种保护作用消失（Brar等人: Mol Vis. 2010; 16:1848-53）。这些研究结果提示在临床上过度直接抑制VEGF可能造成的风险。