[发明专利]解淀粉芽孢杆菌及其在番茄早疫病菌中的应用

说明书

技术领域：

本发明涉及微生物领域，尤指一种解淀粉芽孢杆菌B-004，同时还涉及该菌株对番茄早疫病菌的抑制作用。

背景技术：

早疫病菌是番茄果实采后腐烂变质的主要病原菌之一。目前对该病的防治主要是低温贮藏结合化学防腐剂的应用。但低温处理需要较大的投资，且容易造成番茄贮藏中的冷害问题，导致番茄在低温期间或出库后短期内出现腐烂。另一方面，长期使用化学药剂会导致病菌产生抗药性，降低化学药剂的防病效果，同时防腐剂对人体健康及环境产生不良影响。生物防治因无毒、高效、成本低，作为一种控制采后病害的新途径成为研究的热点。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种对番茄早疫病菌有明显抑制作用的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)B-004。

本发明所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)B-004，已于2011年1月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.4557。

本发明菌株B-004具有下述性质：

本发明的解淀粉芽孢杆菌B-004在牛肉膏蛋白胨培养基平板上于37℃培养24小时，菌落呈圆形，表面褶皱粘稠，菌落不透明，颜色为白色。将本发明菌株B-004活化进行革兰氏染色、芽孢染色，于光学显微镜下观察到：菌株为杆状，少链，芽孢中生，革兰氏染色阳性。本发明菌株的生理生化特征见下表1：

表1  本发明菌株B-004的生理生化检测表

注：阳性+、阴性-。

通过对本发明菌株B-004的菌落形态、菌体观察及生理生化性状检测，参照《伯杰氏手册》初步确定本菌株B-004为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。通过分析本菌株遗传特征的保守序列16S rDNA，发现本发明菌株B-004与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的同源性为99％，两者处于系统树的同一分支，结合本发明菌株B-004的菌落形态、菌体观察及生理生化性状检测结果，可以判定本发明菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的一个新种，命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)B-004。

培养及发酵条件

培养基中的营养源并无特殊的规定，培养基中可含有常用于微生物培养的碳源、氮源及其他营养源。其中，碳源可为可溶性淀粉、藕粉、葡萄糖、乳糖、海藻糖、蔗糖等。氮源可为蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、NH₄NO₃、NH₄Cl、(NH4)₂SO₄等。其他营养源可为含钾、铁、锌、钠、锰、镁及钙之类的金属盐等。对温度、时间等培养条件并无严格的限制，以适于本发明菌株的生长为宜。

为提高本发明菌株有效成分的产量，通过单因素试验对本发明菌株的培养基成分进行优化，最佳培养基为：可溶性淀粉20g，酵母膏8g，CaCl₂5g，蒸馏水1000mL。为进一步提高有效抗菌物质的含量，对本发明菌株发酵条件进行优化，以接种量2％，初始pH7.0，装液量100mL/250mL，转速210r/min，30℃振荡培养48h为发酵条件时，其抑菌活性最高，经优化条件二次验证，抑菌圈从0.2cm提高到了0.7cm，为进行发酵罐放大试验提供了基础。

在制造以本发明所述菌株为有效成分的农用杀菌剂时，可使用该领域内已知的各种载体，并能配制成粉剂或水剂等剂型，配制成粉剂时需加10％乳糖作为保护剂、5％蛋白胨作再水化剂。杀菌剂中本发明菌株的浓度为10⁶～10⁸CFU/mL。

本发明菌株对番茄采后早疫病菌具有明显拮抗效果，可抑制番茄早疫病菌的生长，达到防病效果，并可进一步制造以本发明所述菌株为有效成分的农用杀菌剂，从而，对利用生物防治途径来控制番茄贮藏期早疫病具有积极的现实意义。

具体实施方式：

实施例1