[发明专利]一种肿瘤坏死因子受体1前配体装配域缀合物的结构及用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种肿瘤坏死因子受体1前配体装配域蛋白缀合物。

背景技术

肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族的胞外区主要负责与配基的识别与结合，它们的胞外区通常含有1至6个富含半胱氨酸的结构域(CRD)。这些受体通常以三聚体结合配体，发挥受体功能。而上述功能则是由含有至少1个富含半胱氨酸的前配体装配域所介导。TNFR超家族成员，包括TRAIL受体1、CD40、TNFR1和TNFR2都具备这种缔合功能。Fas、LTβR、HVEM、RANK、CD40、CD30、CD27、OX40和DR4等其它TNFR超家族成员均含有此前配体装配域。

研究发现，在缺少配基的情况下，PLAD对受体聚合体的形成是必须且充分的。虽然PLAD不直接参与对TNFα和TNFβ的识别与结合，但删除PLAD或PLAD发生突变，配体与受体的亲和能力会丧失。因此，PLAD对于TNFR多聚体的形成以及配基结合相关，在TNF相关信号传导途经中起着至关重要的作用。TNFR超家族成员是通过预先形成的聚合体而不是通过配体诱导的单个受体亚基的交联来传递信号的，因此PLAD可以被靶向封闭以阻断这些聚合体的形成并因此阻断受体功能。PLAD的发现以及其介导的配基非依赖型受体组成功能的阐明为相关疾病的治疗提供了新思路和新靶点。

目前上市的以TNFα或者TNFR为靶点的治疗类风湿性关节炎的生物药物有Infliximab(英夫利昔)、Adalimumab(阿达木单抗)和Etanercept(依那西普)等。其中英夫利昔和阿达木单抗是TNFα的单抗，而依那西普是可溶性TNFR和Fc片段的融合蛋白。TNFα单抗和TNFR融合蛋白都可以结合过量的可溶性TNFα，从而抑制TNFα引发的信号传导通路。但是由于这种以TNFα为靶点的治疗方法不能区分多种TNFR通路，比如不能区分TNFα和TNFR1和TNFR2的结合，所以在抑制TNFR1引起的疾病时也会抑制TNFR2介导的生理作用，从而可能引起多种副作用，如狼疮样综合症(lupus-like disease)、分枝杆菌感染以及淋巴瘤发生率的增加。

如果以PLAD为靶点，使用PLAD或其功能性突变体等封闭TNFR的PLAD区，可以特异性地抑制某种TNFR的聚合，从而终止TNFR-TNF复合物的形成，达到终止信号传导的目的。由于每种受体只和自身的PLAD区结合，因此这种结合具有特异性。比如使用TNFR1的PLAD干扰TNFR1的功能的同时，可以避免对TNFR2生理功能的影响，从而避免副作用的产生。

聚乙二醇(PEG)是一类无免疫原性、无毒、水溶性好的聚合大分子，聚乙二醇修饰技术是现在被广泛应用于改善蛋白质生物有效性和理化性质的方法。修饰了聚乙二醇的蛋白质分子由于可以降低其被蛋白酶的降解程度、减少肾小球滤过率、增大蛋白的水溶性和降低蛋白质分子的免疫原性，因此可以被赋予更好的生物和理化特性，扩大蛋白质和多肽的应用范围。其中，由于PEG分子长链的柔性以及其较大的分子量，PEG修饰后的蛋白质在体内的体内半衰期可以得到有效延长，延缓其体内的清除时间，并且可以有效改善蛋白质的生物分布。目前，FDA已批准多种PEG修饰的蛋白质类药物进入生物医药应用领域，如PEG修饰的腺苷脱氨酶(PEG-ADA)、天冬酰胺酶(PEG-L-asparaginase)、干扰素α-2b(peginterferon alfa-2b)、干扰素α-2a(peginterferon alfa-2a)、重组人粒细胞集落刺激因子(pegfilgrastim)等。