[发明专利]检测外源基因的核酸杂交膜条及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，涉及一种检测外源基因的核酸杂交膜条及其应用，可用于植物种子、食品及其加工过程、观赏型植物繁殖体等植物种质资源和产品的外源基因检测。

背景技术

全球范围内目前已有十多个国家在广泛种植转基因作物，种植面积达到上千万公顷，涉及作物达到数十种，用这些转基因作物生产加工的食品更是达到上万种。转基因植物具有产量高、抗逆性高、品质好、抗病、抗虫等特性，现已开发的转基因番茄、抗虫棉等产品效果良好，受到农户的重视而进一步加大了种植面积。同时，由于国家加大了转基因产品研究力度，转基因植物的新技术和新产品也在不断产生。

但是，自转基因技术出现，世界各国、联合国组织和其他非政府组织一直关注转基因产品的安全性，尤其关注转基因食品对人的健康和转基因作物对生态的影响，转入苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt）基因等含有毒蛋白的转基因植物更是饱受争议。因此，此类转基因植物产品目前没有用于人类食品加工，而是作为工农业原材料和动物饲料。

由于目前还没有明确转基因技术对人类健康和生态环境是否会产生有害影响，各国政府都对转基因产品采取了谨慎态度。2000年联合国通过的“生物安全议定书”详细规定了转基因生物有关过境、审批、检测和管理等责任，防止有风险的转基因产品任意扩散。2001年欧盟要求对转基因食品进行强制标识管理。因此，对相关产品进行转基因检测、鉴定对加强转基因产品的管理，保障消费者的利益是十分必要的。判断植物种质资源和产品是否为转基因产品、转基因产品的百分含量以及是否为国际上公认的安全性的转基因产品是对转基因植物及其产品进行安全性评价和流向及用途实施监管的基础。

目前对转基因成分的检测主要是对外源基因（DNA）和外源基因表达产物（RNA和蛋白质）进行检测。其中，DNA检测的适用范围广，准确性高，便于定性和定量检测。

DNA的主要检测方法包括Southern杂交法、基因芯片检测法、PCR检测法和其他相关改进方法。Southern杂交法对设备条件要求较低，但是操作繁琐、易污染；PCR检测法是现在常用的检测方法，但设备价格及对试验条件要求较高；芯片技术具有样品用量少，一次检测目标基因多的优点，但是高密度的基因芯片制作成本高，需要检测信号的仪器价格高昂。

膜条杂交法本质上是一种基因芯片检测法，是将寡核苷酸按照可寻址的方式固定在尼龙膜上，形成阵列。同时，根据转基因工程中常用的启动子（如CaMV35S启动子）、终止子（NOS终止子）、筛选基因以及常用的目标基因（如抗虫，耐除草剂基因）等的序列设计捕获探针制作膜条，便能够捕获样品中的目标基因，从而完成检测。膜条杂交能一次检测多个目标基因，且制作成本低，信号检测不需要高端仪器，因此装备简单的实验室都可以应用。

中国专利申请CN01214517提出了一种用于转基因植物鉴定的基因检测芯片，在平面型支承载体的平面上被覆有带正电荷材料的膜层，在该膜层的表面以微点阵方式排布有供转基因植物判断用的外源基因探针；中国专利申请CN101717825A 公开了一种快速检测转基因烟草外源基因拷贝数的方法，用一对SSR特异引物对转基因植物进行PCR检测，就可以快速检测转基因株系的拷贝数；中国专利申请CN1718742A 公开了一种用于诊断β-地中海贫血的核酸杂交膜条及试剂盒，其核酸杂交膜条包括基底和固定于基底上的特异性探针，每一条所述的特异性探针分别针对一个突变的β-珠蛋白基因位点，每一条突变探针包含14-20个碱基的序列。该核酸杂交膜条，对正常、突变杂合子、突变纯合子都很容易判断，且信号特异性非常好，诊断效率和诊断准确性高、又能降低成本；中国专利申请CN101545011公开了一种结核分枝杆菌耐药突变基因检测膜条及试剂盒，将检测结核分支杆菌耐药突变基因的特异性寡核苷酸探针固定于基底上，试剂盒可同时检测rpoB、katG、inhA、embB、rpsL五种基因上多种常见的耐药突变类型，具有检测快速、准确及通量大等优点；中国专利申请CN2758268公开了一种瘢痕疙瘩p53基因检测膜条，该膜条为长条状，分成三格，其中边沿的一格为空白对照格，在另外两格内分别设有等位基因特异性寡核苷酸Pro探针和等位基因特异性寡核苷酸Arg探针，具有检测结果分辨率高，技术简便、快速、可靠的优点。

发明内容

本发明的技术目的在于提供一种检测外源基因的核酸杂交膜条；本发明的另一个技术目的在于提供一种该核酸杂交膜条的应用方法。