[发明专利]重组质粒pET32a-hIL-23R-CHR及其构建表达

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及人IL-23R细胞因子受体区(hIL-23R-CHR)，构建了hIL-23R-CHR区和8个hIL-23R-CHR突变体，以及pET32a-hIL-23R-CHR的构建表达及其产物的纯化方法。

背景技术

1.IL-23R与IL-23的关系

IL-23是一个拥有异二聚体结构的造血细胞因子，由p40和p19两个亚基组成，结构上与IL-12共享p40亚基，功能类似于IL-12，可导致人类T细胞的增殖和IFN-γ的产生。与IL-12不同的是，IL-23对人类和鼠类只优先刺激记忆性T细胞而不是初始T细胞群。IL-23可作用于活化T细胞、记忆性T细胞和树突状细胞，产生IFN-γ和IL-12等细胞因子，在炎症性疾病、自身免疫性疾病的发病以及抗肿瘤和抗感染等方面发挥重要作用，有望成为新的免疫治疗因子。

IL-23R和IL-12Rβ1共同组成IL-23的受体复合物，其中，IL-12Rβ1是IL-12R的两个亚基之一，另一亚基是IL-12Rβ2。IL-23R是造血因子受体超家族的一个新的成员，位于人1号染色体上。IL-23R蛋白包含一个细胞外区域、一个单跨膜区域和一个有252个氨基酸的胞质区域。其胞外区不同于其他造血因子受体超家族成员的三个膜纤维蛋白连接，而是由一个信号序列、一个N端免疫球蛋白样结构域和2个细胞因子受体区域组成。IL-23与IL-12使用相同的Jak-stat信号分子，如Jak2、Tyk2、stat1、stat3、stat4和stat5，而IL-23R主要是运用Jak2和stat3信号分子。细胞对IL-12或IL-23的反应能力通过分别检测IL-12Rβ2和IL-23R的表达而测定。

2.IL-23R与TH17的关系

Th17是最近研究发现的一类不同于Th1和Th2细胞的CD4⁺T细胞亚群，此亚群细胞高表达IL-17，同时也产生IL-6和TNF-α。Th17细胞亚群的分化和功能均受Th1和Th2细胞因子的调控。目前Th17的确切调控机制仍不十分清楚，受多种细胞因子(IL-23、IL-12、IL-6、TGF-β、INF-γ等)、转录因子(RORgammat)的共同作用影响，具有自己独特的分化、发育途径。TGF-β1、IL-6是Th17细胞分化的启动者，IL-23是Th17细胞分化的促进者，IL-23在Th17细胞分化过程中具体的作用机制被认为与STAT-3有关，因为IL-23可以介导STAT-3的磷酸化过程，使STAT-3激活从而促进IL-17的分泌。IFN-γ、IL-4是Th17细胞分化的抑制因子。Socs3是一种重要的Th17细胞分化的负向调节蛋白，其机制可能是限制了STAT-3的磷酸化过程。Th17可以产生多种细胞因子，其中最主要的是IL-17。IL-17属于促炎因子，与许多炎症反应和自身免疫性疾病的发生和发展有关，如器官移植排斥反应、肿瘤及类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、哮喘等炎症免疫性疾病，这些患者的血清和病变组织中都能检测到IL-17。研究证实IL-23刺激TH17的扩增和维持，故IL-23R对TH17细胞亚群来说是一个关键的作用因子。IL23-IL23R-TH17-IL17轴在自身免疫性疾病中的致病性也已被证实。减少被IL-23刺激的IL-17的产生就可以减少EAE在小鼠模型中的发生，同时运用IL-17的抗体可以提供部分的保护作用。更进一步的研究表明，重组基因IL-23p19能够加剧小鼠的结肠炎，相反抗IL-23p19抗体的治疗就能够改善EAE。因此TH17细胞在炎症免疫性疾病中具有重要作用，可以作为一个新的药物作用靶分子。

3.IL-23R与炎症免疫性疾病的关系