[发明专利]一种建立大鼠葡萄膜炎模型的方法

说明书

技术领域

本发明涉及建立大鼠葡萄膜炎模型的方法，具体涉及采用霍乱弧菌内毒素建立大鼠葡萄膜炎模型的方法。

背景技术

葡萄膜炎(EIU)是一种常见的眼部炎症，易反复发作且牵涉到眼内多种组织，其具体发病机制目前尚不清楚，因此有必要建立合适的动物模型以进行研究。已有研究表明，内毒素注射可以诱导动物的实验性葡萄膜炎。

内毒素诱导的葡萄膜炎动物模型已成为人们研究葡萄膜炎重要的动物模型，它对人们了解葡萄膜炎的发病机制及治疗葡萄膜炎做出了重要贡献。

细菌内毒素(endotoxin)首先由Broivin等于1933年用三氯醋酸自鼠伤寒杆菌中提出。当时因一般蛋白质反应呈阴性，故称为“脂多糖”(Lipopolysaccharide，LPS)抗原，后人称为Borirn型抗原。

细菌内毒素主要由革兰氏阴性菌产生，存在于细菌细胞内，为细胞壁结构成份，细菌细胞崩解时才释放出来。化学成分主要为磷脂-多糖-蛋白质复合物。我们曾对6种革兰氏阴性菌内毒素诱导大鼠葡萄膜炎模型，结果只有霍乱弧菌内毒素诱导成功率高，并且以18001株，古典生物型，小川血清型的霍乱弧菌内毒素诱导大鼠葡萄膜炎的方法报道的比较多。

其中《眼科新进展》2002年12月第22卷第6期，本发明的发明人卢弘发表的“霍乱弧菌内毒素诱导大鼠葡萄膜炎的组织切片研究”中报道了霍乱弧菌内毒素诱导的葡萄膜炎模型，该发明中采用LPS与PBS和完全福氏佐剂(或称弗氏佐剂)、LPS与PBS和百日咳两种配方作为诱导剂，其中LPS与PBS和完全福氏佐剂用于足垫部的注射，每只0.4ml；LPS与PBS和百日咳用于腹腔注射，每只0.15ml。

免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用，能促进、延长或增强对抗原特异性免疫应答的物质。弗氏佐剂(Freund’sadjuvant，FA)是目前动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂(FIA)和完全弗氏佐剂(FCA)。不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1-5∶1，可根据需要而定，通常为2∶1。不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2-20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂。FCA是标准的诱生体液免疫和细胞免疫的佐剂，它诱导I型辅助T细胞(T helpercell；Th1型)细胞因子，而FIA则是典型的只诱导Th2型细胞因子诱生抗体的佐剂。

免疫佐剂作用机理：免疫系统受到抗原物质刺激后，抗原可被抗原提呈细胞如巨噬细胞、树突状细胞摄取，加工处理，降解为多肽片断，通过主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex；MHC)或MHC类分子途径提呈给T淋巴细胞。T淋巴细胞被激活、复制、增殖、分化，成为效应T淋巴细胞，主要包括CTL和CD4⁺Th细胞。前者分泌细胞毒素及诱导细胞凋亡以杀死带抗原的靶细胞；后者受细胞因子、抗原特性等因素的影响，向Th1细胞或Th2细胞分化。Th1细胞偏向分泌白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)，与介导迟发型超敏反应的TDTH细胞和CTL细胞的增殖、分化、成熟有关，可促进细胞介导的免疫应答，也可辅助特异性IgG2a亚类抗体的产生，即Th1应答。Th2细胞偏向分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10与B细胞增殖、成熟和促进IgG1亚类和IgE抗体生成有关，可增强抗体介导的免疫应答，即Th2应答[本实验中百日咳杆菌的作用是第二佐剂。在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveoretinitis，EAU)模型中必须加用第二佐剂才能诱导出炎症。

用弗氏完全佐剂和百日咳杆菌作为LPS的佐剂诱导葡萄膜炎进行葡萄膜炎发病机制的研究有许多混杂因素。

为了克服现有模型的缺点，使得该模型更符合伦理学要求，发明人提到了进行了大量的试验，最终确定本发明。

发明内容

本发明的目的是提供一种霍乱弧菌内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎模型的建立方法。

本发明提供的一种建立大鼠葡萄膜炎模型的方法，包括以下步骤：

1)大鼠：选用6-8周龄，180-200g，SPF级封闭群雄性Wistar大鼠；

2)腹腔注射150-400μg霍乱弧菌内毒素，诱导的模型即为大鼠葡萄膜炎模型。

本发明提供的霍乱弧菌内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎模型具有以下优势：

1、该模型临床及组织学特征稳定，重复性好，诱导成功率高可以达到100％；

2、本发明提供的模型为进一步研究EIU发病机制提供了重要工具；