[发明专利]一种用于临床检测的测序方法

权利要求书

1.一种结合荧光定量PCR的基因测序方法，其特征在于，它包括如下步骤：

1）荧光定量PCR：使用目的片段特异性的引物和荧光探针，对目的片段的核酸模板，进行扩增，得到目的片段的定量结果和PCR产物；

2）酶解：用外切酶和牛小肠碱性磷酸酶处理步骤（1）得到的PCR产物，以降解多余的引物和dNTP，避免对后续反应的干扰；

3）测序反应：使用目的片段特异性的测序引物，对步骤（2）得到的酶解产物进行延伸反应，获得带荧光标记的测序产物；

4）测序产物纯化：使用醋酸钠、无水乙醇、甲酰胺处理步骤（3）得到的测序产物，以获得高纯的测序产物；

5）测序仪检测：将步骤（4）得到的测序产物上测序仪进行检测，获得目的片段的基因序列。

2.一种基于权利要求1所述方法的基因检测试剂盒，其特征在于，所述基因检测试剂盒至少包含如下部分：

1）用于荧光定量PCR的各反应试剂，至少包括：PCR反应液、目的片段特异性的上游PCR引物、目的片段特异性的下游PCR引物、目的片段特异性的荧光探针、耐高温的DNA聚合酶；

2）用于PCR产物酶解的试剂，至少包括：外切酶和牛小肠碱性磷酸酶；

3）用于测序反应的试剂：至少包括：目的片段特异性的测序引物、测序反应液。

3.权利要求2所述基因检测试剂盒，还可以包括：阴性质控品、阳性质控品、定量标准品、尿嘧啶-N-糖基化酶、醋醋酸钠、无水乙醇、甲酰胺等试剂。