[发明专利]流产嗜性衣原体外膜蛋白单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，涉及一种流产嗜性衣原体单克隆抗体及其制备方法与应用，尤其涉及一种流产嗜性衣原体POMP18D N端蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用。

背景技术

流产嗜性衣原体(Chlamydia abortus，C.abortus)是一大群与革兰氏阴性菌有密切关系的专性真核细胞内寄生的原核生物，其能引起各种动物和人的感染，对许多国家的畜牧业生产造成巨大的经济损失和影响公共卫生。流产嗜性衣原体是比较常见的导致母畜流产的病原体，近几年，邱昌庆等人对目前国内各省份的规模化猪场进行的猪衣原体病的调查显示，猪衣原体感染总体呈上升趋势，如1987年四川的感染率为11.45％，1989年为15.52％，2003年上升到80％，给集约化养猪业造成严重的经济损失。

在衣原体诊断方面，目前应用最多抗原的仍然是主要外膜蛋白(MOMP)和脂多糖(LPS)。包括根据ompA基因保守性建立的检测抗原的多聚酶链式反应(PCR)技术，根据检测LPS特异性建立的直接免疫荧光抗体检测技术，如英国OXOID公司的衣原体荧光检测试剂盒，以及放大酶联免疫吸附实验(PCE-ELISA)方法。检测抗体的试剂盒，如以LPS包被的间接荧光试剂盒(以色列Savyon Diagnostics)，以MOMP为包被抗原的酶联免疫吸附试剂盒(法国IDVET)抗体检测试剂盒等。但是PCR技术诊断周期长、适用范围窄，不利于临床推广，而进口抗体检测试剂盒虽然可信度较高，但成本也高、也不利于临床普及。

发明内容

本发明的目的是提供一种流产嗜性衣原体外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用。

本发明提供的流产嗜性衣原体外膜蛋白单克隆抗体是由杂交瘤细胞株1F10D4产生的，其免疫原为流产嗜性衣原体(C.abortus)外膜蛋白是以POMP18D N端首段重组蛋白POMP18D-1为免疫原，免疫Balb/c小鼠，然后筛选出的杂交瘤细胞株。本发明提供的杂交瘤细胞株1F10D4，已于2011年03月10号在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区大屯路甲3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)保藏，保藏号为CGMCC No.4658。

本发明还提供流产嗜性衣原体单克隆抗体的制备方法，其是以流产嗜性衣原体外膜蛋白POMP18D N端蛋白作为抗原免疫小鼠，免疫后的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合获得分泌流产嗜性衣原体POMP18D N端蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，得到流产嗜性衣原体POMP18D N端蛋白单克隆抗体。

其中，所述的流产嗜性衣原体外膜蛋白POMP18D N端蛋白为冷冻抽干粉，免疫时用适量的PBS溶液稀释。

流产嗜性衣原体外膜蛋白POMP18D N端蛋白，命名为POMP18D-1，为：

1)SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

2)SEQ ID No.2的氨基酸序列经过添加标签序列衍生的蛋白质。

为了使1)的POMP18D-1蛋白质便于纯化，可在SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1.标签序列