[发明专利]一种羧基化法β-环糊精修饰的低毒性功能化量子点及其制备方法

权利要求书

1.一种羧基化法β-环糊精修饰的低毒性功能化量子点，其特征在于：由β-环糊精通过化学方法连接上羧基，再进一步与叶酸偶联形成叶酸-β-环糊精；所述量子点为低毒性功能化量子点，组成低毒性功能化量子点的元素为银、锌和铟；该量子点通过叶酸-β-环糊精修饰得到β-环糊精修饰的低毒性功能化量子点；

该β-环糊精修饰的低毒性功能化量子点的组成为银离子︰铟离子︰锌离子︰NaS₂CN(C₂H₅)₂︰叶酸-β-环糊精的摩尔比为0.9-0.95︰0.9-0.95︰0.1-0.2︰3.5-4.5︰4-6。

2.权利要求1所述羧基化法β-环糊精修饰的低毒性功能化量子点的制备方法，其特征在于步骤如下：

（1）羧基-β-环糊精的制备

在容器中加入4.5-5.5mmol的β-环糊精和55-65mL去离子水，在磁力搅拌情况下加入8-10mmol KOH使β-环糊精全部溶解；逐渐升温至45-55℃，加入9-11mmol羧基化试剂，连续搅拌条件下升温至85-95℃并保持1小时，然后停止加热；待反应体系冷却至室温后，用稀硫酸调节反应体系的pH为5-6，加入100-200mL无水乙醇，利用中性氧化铝柱进行纯化层析，采用55%-65%乙醇作为洗脱剂，收集洗脱液，浓缩洗脱液后真空干燥，得到羧基-β-环糊精；

（2）羧基-β-环糊精与叶酸的偶联制备叶酸-β-环糊精

a、叶酸的活化：在容器中加入4.5-5.5mmol 叶酸并溶解在11-13mL无水二甲基亚砜中，在不断搅拌条件下加入5.5-6.5mmol 1-乙基-3-（3-二甲基丙胺）碳二亚胺盐酸盐和5.5-6.5mmol N-羟基琥珀酰亚胺活化反应4小时；

将活化后的叶酸滴加到含有180-220mg的双氨基聚乙二醇的无水二甲基亚砜溶液中，避光条件下反应10小时，然后通过硅胶柱层析的方法纯化，获得叶酸-聚乙二醇偶联物；

b、叶酸-聚乙二醇偶联物与羧基-β-环糊精的偶联

在45-55mL无水二甲基亚砜溶液中加入1.8-2.2 mmol步骤（1）制备的羧基-β-环糊精，溶解后加入1.8-2.2mmol 1-乙基-3-（3-二甲基丙胺）碳二亚胺盐酸盐和1.8-2.2mmol N-羟基琥珀酰亚胺活化反应6小时，然后将活化液滴加到上述含有叶酸-聚乙二醇偶联物的缓冲液中，避光条件下反应24小时；反应的粗产物通过硅胶柱层析的方法纯化，获得叶酸-β-环糊精；

（3）量子点的制备

a、前驱体的制备：将0.9-0.95mmol AgNO₃、0.9-0.95mmol In(NO₃)₃、0.1-0.2mmol Zn(NO₃)₂溶于3-5mL的去离子水中，再将3.5-4.5mmol NaS₂CN(C₂H₅)₂溶于2.5-7.5去离子水溶液中，两者混合后磁力搅拌20-40min除去其中的水分，并依次用10-14mL的去离子水和8-12mL甲醇洗涤，得到量子点前驱体二乙基二硫代氨基甲酸盐；

b、油溶性量子点的制备：在氮气保护条件下将步骤a所得量子点前驱体二乙基二硫代氨基甲酸盐缓慢加热至170-180℃，并保持该温度40-60min，然后向其中加入2-4mL油胺，继续加热2-4min后停止加热，并逐渐冷却至室温；

c、量子点的纯化处理：将步骤b所得油溶性量子点在500-2500r/min离心2-5min，取上清液，向其中加入8-12mL甲醇，搅拌1-5min后用真空抽滤方式得到纯化的量子点；

（4）量子点的功能化修饰

取步骤（3）所得的纯化量子点溶于1.5-8.5mL三氯甲烷溶液中，步骤（2）所得叶酸-β-环糊精溶于1.5-6.5mL去离子水中，混合后搅拌3-10min，500-2500r/min离心，取水层即得产物羧基化法β-环糊精修饰的低毒性功能化量子点。

3.根据权利要求2所述羧基化法β-环糊精修饰的低毒性功能化量子点的制备方法，其特征在于所述羧基化试剂为2-氯乙酸钠，3-氯丙酸钠，3-溴丙酸钠，4-氯丁酸钠，4-溴丁酸钠。

4.权利要求1所述羧基化法β-环糊精修饰的低毒性功能化量子点的应用，其特征在于所述量子点作为探针用于肿瘤标志物的特异性荧光检测。