[发明专利]一种提高水稻穗转化法效率的培养基配方无效

专利信息
申请号: 201110100259.X 申请日: 2011-04-21
公开(公告)号: CN102329815A 公开(公告)日: 2012-01-25
发明(设计)人: 夏勉;张斌;张建新 申请(专利权)人: 北京未名凯拓作物设计中心有限公司
主分类号: C12N15/82 分类号: C12N15/82
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 100085 *** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 一种 提高 水稻 转化 效率 培养基 配方
【说明书】:

技术领域

 本发明涉及植物转基因工程领域,具体地是涉及提高水稻浸花转化效率的转化培养基配方。

 

背景技术

水稻是我国第一大粮食作物,产量约占粮食总产量的40%。稻米是我国人民赖以生存的主食。确保水稻生产是保证我国粮食安全的基础,关系国计民生。培育高产、优质、高效的水稻新品种是稳定水稻产量、提高水稻品质的首要任务。传统的遗传育种技术为提高水稻的产量和改善质量做出了重大的贡献,但传统的杂交育种存在周期长、效率低和种间杂交困难等问题,加上水稻种质的匮乏和生态环境的恶化,给水稻的遗传改良带来了一定的困难。大大限制了水稻新品种的培育。随着分子生物的发展,转基因技术打破了物种隔离, 为植物种质资源创新,定向选育优质高产高效的新品种提供了一个有效的操纵平台。

目前,用于水稻转基因技术的方法主要有基因枪转化法和农杆菌介导的转化法。基因枪转化方法是上个世纪80年代发明的一种转基因技术,其优点是不受物种限制、受体取材广泛(几乎所有具有潜在分化能力的原生质体、细胞、组织和器官都可以受体)、转化效率高;但是该方法也存在着基因插入不完整、高比例的不育、多拷贝频率高以及仪器设备费用高等缺点。农杆菌介导的水稻转化方法因谷物类作物不是农杆菌的天然宿主等原因而研究和开发的时间比较晚,但该方法具有转化频率高、多拷贝频率低、成本低、操作简便等优点而成为水稻转化最常用的转基因技术。现阶段,基因枪和农杆菌介导的水稻转化方法都需要经过植物的再生阶段,因此转化实验的成功很大程度上依赖高效高频的水稻再生体系的建立。水稻的再生体系受品种、基因型等条件的限制。目前,粳稻的再生体系已经比较成熟,农杆菌介导的粳稻转化效率也可以达到60%甚至更高,但是籼稻的最高转化效率只有10%左右。而籼稻品种占整个水稻品种的80%,因此如何建立籼稻的高频再生体系从而提高其转基因效率一直是困扰生物学家的一个难题。许多生物学家围绕着此问题展开了一系列的研究,包括改变培养基的配方、调节转化时间、改变农杆菌的转化浓度等,但是取得的成就并不显著,籼稻的转化效率并没有明显的提高。

有科学家从另一个角度入手,建立了农杆菌介导的水稻穗转化法,以水稻穗为转化受体,不需要漫长而复杂的水稻再生过程,避开了上述水稻再生体系建立的种种问题。本发明人经过长时间的摸索,得到了一种能够提高水稻穗转化效率的转化培养基配方,该培养基配方将将大大加快水稻穗转化法的应用和推广,具有非常重要的意义。

发明内容

本发明提供了一种提高水稻穗转化效率的培养基配方,具体地该培养基用于农杆菌用的悬浮,所述转化培养基含有细胞分裂素、silwet L-77、曲拉通X-100和赤霉素。

本发明所提供水稻穗转化的方法,所用的转化培养基添加了胞分裂素6-BA、silwet L-77、曲拉通X-100和赤霉素GA。其中,转化培养基中细胞分裂素6-BA的用量优选50μg/L;silwet L-77的用量优选80μg/L;曲拉通X-100的用量优选100μg/L;赤霉素GA的用量优选5μg/L。

本发明含有目的基因的农杆菌的获得,是将目的基因插入表达载体,再将该载体导入农杆菌中。常用的表达载体包括但不限于:pBin系列载体、pBI系列在、Gateway系列载体、pCAMBIA系列载体;常用的农杆菌菌株包括但不限于:AGL0、AGL1、GV3101、EHA105、LBA4404等。

本发明提供了一种提高水稻穗转化效率的培养基配方,该配方适用于籼稻或粳稻的野生或栽培品种、中间材料或育种材料。根据本发明的启示,显然,本领域的技术专家可以在本发明的基础上进行一些改进和修改,这些改进和修改也纳入本发明中。为了便于理解,下面将结合附图和实施例进一步诠释本发明。具体实例和附图仅是为了更好的阐述本发明,并不构成对本发明范围的限制。显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明,在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变,这些修正和改变也纳入本发明的范围内。

附图说明

图1 载体KAT-A1示意图。

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明,均为常规方法,所用试剂购自上海生工生物工程有限公司,引物均由上海英骏生物技术有限公司合成, PCR试剂盒来自Invitrogen公司,方法均参照试剂盒提供的方法进行。实验中所用的载体、菌种属于本实验室。

实施例 1、水稻穗法转化籼稻明恢63获得转基因植株

一、水稻穗法转化水稻植株

1. 实验材料

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