[发明专利]家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及禽类、鱼类、昆虫的管理，具体是指一种采用人工注射滞育激素方法，使家蚕无滞育期多化性品种能够产下滞育卵，从而达到高效、安全保存的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法。

技术背景

家蚕为卵态滞育，在自然条件下，按照一年中发生世代不同分为一化、二化和多化性品种。多化性蚕品种又分为有滞育期多化性品种和无滞育期多化性品种。有滞育期多化性品种在各个世代均有部分卵滞育，而无滞育期多化性蚕品种发育快，生活周期短，各世代均产无滞育卵，全年需要不间断地饲养7～8代才能继代保存。由于地理气候原因，全国大部分地区每年只能用桑叶养蚕4～5次，在当年的11月至次年3月没有桑叶生产期，只能利用家蚕人工饲料进行饲养继代保存，给无滞育期多化性蚕品种的保存带来很大困难。而且利用人工饲料养蚕技术要求高、成本高，以及不同蚕品种对人工饲料适应性不同，用人工饲料饲养保存无滞育期多化性蚕品种存在很大风险。因此，有必要在不影响保存品种的化性、主要特征特性和经济性状的条件下，对无滞育期多化性蚕品种冬季的保存技术进行创新，以保证无滞育期多化性品种冬季能够得到安全、高效的保存；且能减少2-3次的养蚕次数，节约大量的人力、物力和财力，大大提高保存工效。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对无滞育期多化性蚕品种冬季保存存在的问题，提供一种在蚕蛹期采用注射人工合成的昆虫滞育激素(diapause hormone，DH)，使无滞育期多化性蚕品种产下非遗传性的滞育卵，在冬季能够得到安全、高效保存的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法。

本发明的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法以微量注射器为注射工具，以人工合成的昆虫滞育激素的稀释液为注射液，采用在蚕蛹期注射人工合成的昆虫滞育激素，使无滞育期多化性蚕品种产下非遗传性的滞育卵，在冬季得到保存；保存方法的具体实施步骤和控制条件如下：

1、选择注射时期：在家蚕无滞育期多化性品种进行桑叶饲养至最后一个蚕期的蛹期进行；

2、蛹期经过时间的确定：家蚕无滞育期多化性品种在环境温度为25.5℃的条件下，蛹期经过9天左右，蜇中经过11天左右；待熟蚕吐丝完毕结成茧后，削开尚未化蛹的蚕茧，平铺于恒温箱中，温度控制在25℃-26℃，相对湿度70％-75％，观察并记载每头蚕的实际化蛹时间，以备注射所用，雄性蚕蛹正常保护，供化蛾交配用，以小时计算雌蛹在化蛹后所经过的时间；

3、配制注射液：在注射前采用无菌水稀释人工合成的昆虫滞育激素(diapause hormone，DH)，配制成有效成分含量为0.5μg/μl的注射液；昆虫滞育激素原剂需在-70℃的条件下保存，配制稀释液时要将原剂缓慢解冻后，再现配现用；

4、注射：将已选出的在有效注射期内的雌蚕蛹，用经体积百分含量浓度为75％的酒精浸渍的酒精药棉，将整个蚕蛹体擦拭消毒，同时消毒实验用具和双手，然后选用10μl的微量注射器进行注射，注射有效期为从化蛹后经过18h至120h，个体注射有效剂量在0.5μg/蛹至2μg/蛹之间，用微量注射器抽取滞育激素稀释液，注射器针头对准蚕蛹腹部的第四和第五腹节间平行刺入蚕蛹体内，刺入深度约1cm，定量注入注射液后缓慢拔出针头，然后再对蚕蛹体的注射伤口用经体积百分含量浓度为75％的酒精浸渍的酒精药棉进行消毒；

5、注射滞育激素液后的蚕蛹及蚕卵的保护：将已注射滞育激素液后的蚕蛹分摊于消过毒的透气容器盒内，在25℃-26℃的温度和70-75％的相对湿度条件下保护至羽化，与正常雄蛾交配，产下的非遗传性滞育蚕卵，按常规方法进行保护。

人工合成的昆虫滞育激素(diapause hormone，DH)，是一种多肽激素，由24个氨基酸残基组成，C末端酰胺化，氨基酸序列为H-Thr-Asp-Met-Lys-Asp-Glu-Ser-Asp-Arg-Gly-Ala-His-Ser-Glu-Arg-Gly-Ala-Leu-Cys-Phe-Gly-Pro-Arg-LeuNH2，分子量为2645。稀释人工合成昆虫滞育激素的无菌水采用三角瓶装蒸馏水，并用高压蒸汽灭菌法灭菌，灭菌控制条件：压力：103.4KPa，温度：121℃，时间：20分钟。注射消毒药棉为经体积百分含量浓度为75％的酒精浸渍的酒精药棉。注射器为10μl的微量注射器。