[发明专利]一种抗甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体及其制备与应用

说明书

技术领域

本发明涉及流感免疫检测领域，特别是涉及一种抗甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体及其制备与应用。

背景技术

流感病毒属正粘病毒科，系RNA病毒。病毒内部的核心由单链核糖核酸及核蛋白(NP)组成，根据核蛋白的抗原性不同可分为A(甲)、B(乙)、C(丙)三型，每型又可区分为不同亚型。甲型变异较快，每2-3年可发生一次，乙型变异较慢。当抗原发生较大的变异时，与前次流行株完全不同，是抗原的质变，称为抗原株变，此时产生了新的亚型。由于人群对新的亚型缺乏抗体，因此常可引起大的流行。

引起流行性感冒(简称流感)的主要病毒是甲、乙型流感病毒，通常只有甲型和乙型流感病毒会引起大流行或局部的暴发流行。传统病毒分离培养和红细胞凝集抑制试验(HI)鉴定方法特异性和敏感性强，但病毒分离培养耗费时间较长，需要有流感病毒型特异性抗血清，对于人群聚集性流感暴发提供病原体诊断依据相对较慢。多重逆转录聚合酶链反应(mRT-PCR)检测耗时4小时，灵敏度也可以，但是需要专用设备，使用不方便，投入也比较大。胶体金法出结果快速，只需20min，操作简便，适于现场检测。

病毒的核蛋白(NP)是保守的结构蛋白，在病毒进化过程中变异率很低。同样，对流感病毒NP的研究也已经证明了其结构的保守性。目前多种RNA病毒(如新城疫病毒，狂犬病毒，水疱性口炎病毒，麻疹病毒等)的核蛋白都已作为抗原用于ELISA诊断试剂盒中。单克隆抗体可用于分析抗原的细微结构及检验抗原抗体未知的结构关系生产出针对复杂生物混合物中的特定分子的抗体，可用于分离、分析及纯化该特定分子抗原；其试剂可用于临床诊断和治疗。

甲型流感病毒NP结构高度保守，且具有很强的免疫原性，能诱导产生抗体。这一特性也被用来研制甲型流感病毒NP单克隆抗体进行诊断。因此可以使用抗NP的抗体来检测所有亚型的流感病毒。但是NP并非完全保守，因此要保证所制备的单抗是针对其保守性抗原位点的。目前在流感的快速检测领域，目前没有很好的国产试剂盒，而国外试剂盒价格又比较昂贵，所以研究开发适合于快速检测用的抗体具有重要意义。

发明内容

本发明的一个目的是得到一种特异性强的抗甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体。

本发明的另一个目的是提供一种特异性高、灵敏度高的甲型流感病毒检测试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明公开了一种分泌抗甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株H1N1-2F10，该细胞株已于2011年4月17日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC C201119。

本发明公开了一种由上述保藏号为CCTCC C201119的杂交瘤细胞株分泌的抗甲型流感核蛋白单克隆抗体。

本发明同时公开了保藏号为CCTCC C201119的杂交瘤细胞株在制备甲型流感检测试剂或设备中的应用。

本发明还公开了上述抗甲型流感核蛋白单克隆抗体在制备甲型流感检测试剂或设备中的应用。

本发明提供了一种甲型流感病毒快速检测试纸，包含上述由保藏号为CCTCC C201119的杂交瘤细胞株产生的抗甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体。

所述甲型流感病毒快速检测试纸，进一步包含上述由保藏号为CCTCCC201119的杂交瘤细胞株产生的抗甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体包附胶体金。

本发明还提供了一种根据上述甲型流感病毒快速检测试纸组装成的甲型流感病毒检测试剂盒。

本发明同时还提供了上述试剂盒在甲型流感检测中的应用。

由于采用以上技术方案，本发明的有益效果在于：

1、本发明得到的杂交瘤细胞株分泌产量高，其分泌得到的抗甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体具有高亲和力、高特异性等优点。

2、本发明提供的甲型流感病毒检测试剂盒与现有的流感检测试剂盒相比，在特异性、灵敏度、检出率方面都更具优势。

保藏信息

培养物名称：杂交瘤细胞H1N1-2F10

保藏日期：2011年4月17日

保藏单位：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心，即中国典型培养物保藏中心(CCTCC)

保藏编号：CCTCC No：C201119

具体实施方式

本发明采用重组甲型流感核蛋白抗原作为免疫原，制备得到杂交瘤细胞系H1N1-2F10。该杂交瘤细胞能高表达的分泌出具有高抗原亲和力、高特异性的抗甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体。