[发明专利]一种检测植物中目标基因的方法及其专用SPR生物传感器

权利要求书

1.一种辅助检测或检测待测生物中目标基因的方法，包括如下步骤：

1)提取待测生物的基因组DNA作为模板，以如下权利要求5或6所述试剂中的所述引物对作为引物，进行PCR扩增，得到PCR产物；

2)将步骤1)得到的PCR产物变性为单链DNA分子；

3)将步骤2)得到的单链DNA分子流经如下权利要求7或8所述的SPR生物传感器的传感芯片，若检测的RU值发生改变，则所述待测植物中候选含有或含有目标基因，若检测的RU值未发生变化，则所述待测植物中候选不含有或不含有目标基因。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述生物为植物；所述目标基因为抗虫蛋白的编码基因。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述植物为转入所述目标基因的植物；

所述抗虫蛋白的编码基因为Cry1Ac；

所述Cry1Ac的编码基因的核苷酸序列为序列表中序列1。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

在所述步骤1)后和所述步骤2)前，还依次包括纯化所述PCR产物和缓冲处理所述PCR产物的步骤；

所述缓冲处理PCR产物包括如下步骤：将所述纯化得到的纯化后PCR产物与PH值为7.4的PBM缓冲液混匀，得到缓冲处理后PCR产物；

步骤2)中，所述变性采用的温度为100℃，所述变性采用的时间为5min；

步骤3)中，所述流经的速度为5μl/min，所述流经的温度为25℃，所述流经的时间为4min。

5.一种用于辅助检测待测生物中目标基因的试剂，由探针和用于扩增所述探针的引物对组成，

所述探针为满足如下1)和2)条件的单链DNA分子：

1)不存在发夹结构和二聚体；

2)与所述目标基因的核苷酸序列的同一性大于90％。

6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于：

所述探针的大小为25nt；

所述探针的5′端标记生物素；

所述探针的核苷酸序列为序列表中序列1；

所述用于扩增所述探针的引物对中的一条引物为序列表中的序列2，另一条引物为序列表中的序列3。

7.一种用于辅助检测待测生物中目标基因的SPR生物传感器，为将权利要求5或6所述试剂中的所述探针以共价结合的方式偶联到传感芯片上，得到SPR生物传感器。

8.根据权利要求7所述的生物传感器，其特征在于：

所述传感芯片为SA芯片；

所述目标基因为Cry1Ac基因；

所述偶联包括如下步骤：将含有所述探针的溶液流经活化后的SA芯片，使其与SA芯片表面结合，得到SPR生物传感器：

所述含有所述探针的溶液为将所述探针和PH为7.4的PBM缓冲液混合，得到的溶液，所述探针在所述含有所述探针的溶液中的浓度为1μM；

所述流经的流速为10μl/min；

所述流经的时间为128s；

所述生物为植物，所述植物具体为棉花。

9.权利要求7或8所述SPR生物传感器在辅助检测生物中目标基因中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述生物为植物；所述目标基因为抗虫蛋白的编码基因；

所述植物为转入所述目标基因的植物；

所述抗虫蛋白的编码基因为Cry1Ac；

所述Cry1Ac的编码基因的核苷酸序列为序列表中序列1。