[发明专利]重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗、其构建方法及其应用

说明书

技术领域

    本发明涉及一种重组疫苗，具体地说，涉及一种重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗，属于生物工程技术领域。

背景技术

H5和H9亚型禽流感(AI)和鸡传染性法氏囊病（IBD）是严重危害养鸡业发展的重要疫病。目前，我国对这3种疾病的防控主要依赖于疫苗免疫。

现有禽流感疫苗存在的问题 据OIE统计，从2005年底起，我国实施全面强制免疫以来，我国仍发生42起高致病性H5亚型禽流感。我国学者利用反向遗传技术已经开发出5代H5亚型禽流感疫苗，即Re-1至Re-5，仍赶不上病毒的变易。特别注意的是，2008年江苏东台爆发的禽流感与现用疫苗株Re-4在基因水平上属于同一分支。现有疫苗不能对不断出现的新变易株提供有效保护。因此，亟需一种具有广谱免疫效力的新疫苗。

H9亚型禽流感感染鸡群后症状轻微，其本身并不一定造成禽群的大规模死亡，但易发生并发或继发感染，引起蛋鸡产蛋量显著下降，饲料报酬降低等，造成严重经济损失。随着疫苗的使用，病毒在免疫选择压作用下，发生变异以逃逸免疫。类似于H5亚型禽流感，市场现有多种不同H9疫苗株，如F株、Sy株、SS/94株、HL株和SD696株等，仍不能对新出现的变易株提供有效保护。因此，开发具有广谱免疫效力的新疫苗势在必行。

鸡传染性法氏囊病的危害 鸡传染性法氏囊对我国养禽业造成了巨大的危害，尤其是自1991年强毒和超强毒以及变易株引起的发病，常使局部地区IBD的防控相当困难。防治该病现用疫苗有常规的灭活疫苗和活疫苗，以及初步应用的亚单位疫苗。

现有传染性法氏囊疫苗存在的问题  现用活疫苗包括中等弱毒活疫苗和中等偏强毒疫苗。中等弱毒活疫苗用于无母源抗体的雏鸡早期免疫，对有母源抗体的鸡免疫效果较差，免疫时如果母源抗体的水平仍很高，则该类鸡只不仅免疫效果差、而且会降低其体内循环抗体，导致免疫后数周发病。中等偏强毒疫苗时，能使低母源抗体水平鸡只有较强的免疫反应，但其安全性较差，会致使免疫时低抗体水平鸡只应激水平大甚至发病。另外由于现有生产疫苗的无特定病原（SPF）鸡胚均存在一定程度的REV等外源性病毒污染。这对活疫苗应用带来一定的风险。现用灭活疫苗的生产受鸡胚供应的限制，且该制备过程需要人力较多，很多工艺烦琐，且部分工艺节点难以实现标准化控制。

现有研究表明，流感病毒的M2e能促进机体产生良好的广谱性免疫保护。M.D. Filette 等用M2e与HBcAg融合表达，并与CTA1-DD佐剂联合使用免疫小鼠，能保护H3N1或H1N1的攻毒。A. Jegerlehner等研究表明，将M2e蛋白与HBcAg偶联的免疫效果优于M2e与HBcAg嵌合表达形成病毒样颗粒的免疫效果。G. Zhao等用含多拷贝M2e抗原免疫小鼠后，能对不同H5N1分支病毒的攻击提供有效保护。禽流感M2e与血蓝蛋白(KLH)的偶联物制备疫苗，不仅能对同一亚型内不同变易株的攻击提供保护，还能对不同亚型禽流感病毒的攻击提供保护，提高其存活率达80%。但KLH是一种异源蛋白，诱导产生大量与禽流感免疫无关的抗体。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足之处，提供一种抵抗禽流感和鸡传染性法氏囊病毒的重组疫苗。

本发明的重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗中，包含带有鸡传染性法氏囊病毒VP2基因的重组表达质粒，所说的VP2基因中融合有H5或H9亚型禽流感病毒的M2e基因，其中H5亚型禽流感病毒的M2e氨基酸序列为SLLTEVETPTRN，H9亚型禽流感病毒的 M2e氨基酸序列为SLLTEVETHTRN,VP2基因序列参考GenBank登录号DQ906921。

所说的融合基因中，H5或H9亚型禽流感病毒的M2e基因融合到VP2基因的BC区或羧基端。

所说的VP2基因的BC区融合1拷贝的M2e基因。

所说的VP2基因的羧基端融合4拷贝的M2e基因。

重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗的构建方法，先将H5或H9亚型禽流感病毒的M2e基因融合到鸡传染性法氏囊病毒VP2基因形成重组基因，再将重组基因克隆到大肠杆菌原核表达系统或pFast-Bac-1杆状病毒真核表达系统中表达获得重组表达质粒，并经发酵培养制备重组疫苗。

重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗在制备防治禽流感病毒和鸡传染性法氏囊病毒药物中的应用。

含有重组禽流感M2e的鸡传染性法氏囊VP2亚单位疫苗的组合物。

本发明具有如下技术效果：