[发明专利]重组七鳃鳗鳗溶素、制备方法及在制备抗血栓药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种属于医药与医学工程领域，尤其是一种可阻断血栓形成且有效剂量低、安全范围大、作用强度高、不良反应轻以及低毒的重组七鳃鳗鳗溶素的制备方法及在制备抗血栓药物中的应用。

背景技术

正常情况下，体内止血、凝血系统与纤溶系统处于生理性平衡，保持正常血流状态。但在一些病理情况下，如血管内膜损伤或静脉血流阻滞时，由于血小板活化并粘附到内皮下组织，进而引发一系列止血、凝血过程，最后形成了血栓。血栓的主要成分是由活化的血小板和纤维蛋白组成。因此，特异的抗活化血小板和抗纤维蛋白的药品可以作为血栓导向剂。目前所研制的血小板抗体主要是针对活化血小板上两个主要位点而制备的：                                                GPIIb-IIIaGMP140。而最有效的抗血小板药物就是GPIIb- IIIa拮抗剂，因为不管通过什么受体，什么代谢途径，血小板最后必须通过GPIIb- IIIa复合物的纤维蛋白原受体，才能发生“聚集”而形成血栓。目前，称为“抗血小板药物”的一类药物已经被作为治疗血栓性疾病的有效手段在临床上得到广泛应用，如阿斯匹林等。然而，阿司匹林抗血小板作用的特点是小剂量时抗血小板聚集，产生抗血栓作用；而大剂量时促进血小板聚集，产生促进血栓形成作用。另外，随着阿司匹林长期应用而带来的“阿司匹林抵抗”亦愈来愈限制其抗血栓的临床应用。

日本七鳃鳗(Lampetra japonica)属圆口纲（Cyclostomata）、七鳃鳗目、七鳃鳗科、七鳃鳗属，是迄今发现的最古老的无颌脊椎动物。其为海洋洄游性鱼类，成体生活在海洋，经常用吸盘附在其它鱼体上吸食其血与肉，使被吸附的鱼血流不止，日本七鳃鳗的这种独特生活习性暗示着其口腔腺中必定具有强效抗凝物质。但是，迄今为止还没有以日本七鳃鳗口腔腺为原料，制备抗血栓药物的相关报道。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种可阻断血栓形成且有效剂量低、安全范围大、作用强度高、不良反应轻以及低毒的重组鳗溶素蛋白、制备方法及在制备抗血栓药物中的应用。

本发明的技术解决方案是：一种重组七鳃鳗蛋白-鳗溶素，其特征在于将七鳃鳗鳗溶素基因构建于pET28a(+)载体，并对其在大肠杆菌中进行了高效诱导表达的产物，所述鳗溶素 cDNA序列351bp长，蛋白由117个氨基酸组成，cDNA及氨基酸序列如下：

1

tca acg ttc atc aac gga acc cag gaa gtg gat gcc att tgt cat aag                48

Ser Thr Phe Ile Asn Gly Thr Gln Glu Val Asp Ala Ile Cys His Lys

1                     5                               10                          15

cag aat tat ccc atg ggt acg gag aca cag gga gac aca cgt gga gac             96

Gln Asn Tyr Pro Met Gly Thr Glu Thr Gln Gly Asp Thr Arg Gly Asp

20                             25                           30

aca cgg aca cac acg gag aca caa gct gag gca cgg aca cac gca gag          144

Thr Arg Thr His Thr Glu Thr Gln Ala Glu Ala Arg Thr His Ala Glu

35                           40                            45

acg cac gga gac aca cgt gga gac aca cgg aga cac acg tgg aga cac           192

Thr His Gly Asp Thr Arg Gly Asp Thr Arg Arg His Thr Trp Arg His

50                             55                             60