[发明专利]一种中药复方有效药味的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及中药有效药味的筛选方法，具体过程是通过对已知具有防治肾小球硬化作用的中药复方－愈肾颗粒的拆方重组，从血清药理学、现代分子生物学、细胞生物学角度，从基因蛋白水平研究其对肾小球细胞相关细胞因子表达的影响，最终筛选出具有延缓和防治肾小球硬化进程的有效药味及其有效组分。

背景技术

近年来，中药复方或中成药的有效成分越来越受广大研究者的重视，中药的有效药味及成分是药学研究的根本，但中药复方或大或小，若确证中药复方中的有效药味过程复杂、成分不易控制，对于中药复方有效药味的筛选，目前尚无公认的方法。一般是将中药粗制剂直接进行总体分离，这样的方式实验周期较短，但不足之处在于：中药成分复杂，尤其是粗制剂中含有较多杂质，如直接加入体外反应体系，其酸碱度、渗透压、无机盐等非特异性因素将干扰实验，不利于进一步明确其作用机理，亦难以确定药物真正疗效。

发明内容

本发明的目的，是提供一种中药复方有效药味的筛选方法，该方法是以药效学为导向，以中医理论为基础，体内和体外实验相结合，一方面其实验结果与体内实验结果有较好的一致性，排除一些特异性因素的影响，从而大大提高了中药药效实验的可信度。另一方面，此方法便于观察和追踪药物的吸收和代谢过程，可较为清楚的认识复方药物中中药有效药味及活性部位，为药物的进一步开发提供依据，为探讨中药复方作用规律提供思路。

采用的技术方案是：

一种中药复方有效药味的筛选方法，包括下述步骤：

一、以中医病机、组方原则及功效作为处方优化的依据，针对病机以功效为路径进行拆方，以功效为益气化瘀、凉血解毒的复方制剂——愈肾颗粒（为院内制剂，该复方中药已授予专利权）为例：

1、该药原组方为：黄芪400g、生地黄320g、牡丹皮240g、丹参240g、紫草320g、白茅根320g、小蓟320g、益母草320g、芡实320g、太子参160g、甘草240g、鸡冠花160g和白花蛇舌草320g；按益气化瘀解毒、益气化瘀和益气解毒细化拆出第一复方、第二复方和第三复方；

所述第一复方，即益气化瘀解毒组方，由中药材黄芪400g、丹参240g和白花蛇舌草320g组成。

所述第二复方，即益气化瘀组方，是由中药材黄芪400g、紫草320g和益母草320g组成。

所述第三复方，即益气解毒组方，是由中药材黄芪400g、白茅根320g和小蓟320g组成。

2、应用血清药理学方法，分别制备第一复方、第二复方和第三复方药理血清和正常组（即原处方）药物血清，并按照实验方案灌胃，采血，具体办法为：

（1）、第一复方、第二复方和第三复方中药的制备：

将第一复方、第二复方和第三复方的上述中药材分别放入容器内，用冷水浸泡30分钟，然后分别煎煮三次，煎煮方法为：先武火煮沸后文火保持微沸状态30分钟，将药液滤出，重新加水煎煮，沸后文火保持20分钟，过滤，合并滤液，浓缩至所需浓度，即得。第一复方为300%、第二复方为270%、第三复方为315%。

（2）、正常大鼠血清的制备：每日正常饮食，第三日腹主动脉取血，离心取血清（1500rpm离心5分钟），56℃水浴30min灭火补体后，0.22μm无菌滤器过滤，分装-20℃冻存备用。

（3）、药物血清的制备：三组小复方分高中低三个剂量组，以临床用药量为低剂量组（13g∕kg∕d），中剂量组（39g∕kg∕d），高剂量组（117g∕kg∕d），按照2ml/100g/天的给药剂量灌胃，一天两次连续三天，第三日灌胃后2小时后腹主动脉取血，离心取血清（1500rpm离心5分钟），56℃水浴30min灭火补体后，0.22μm无菌滤器过滤，分装-20℃冻存备用。

3、做相应体外肾小球系膜细胞培养实验，用血管紧张素Ⅱ造肾小球系膜细胞增殖模型后，分别用小复方各组药理血清干预。

具体方法为：

（1）、将大鼠肾小球系膜细胞（MC）放在倒置显微镜下观察其形态：细胞生长状况良好，细胞呈梭型，中央有一清晰的卵圆形核，紧贴于培养瓶壁上，大部分细胞己经融合。

换液时将培养瓶中原有的培养液吸弃其总量的1/2-2/3，加入新的培养液（10%FBS DMEM），所加入的液体覆盖培养瓶底即可，旋紧瓶盖后松半扣，然后放于37℃、5%CO2孵箱中进行培养，约2-3天换液一次。