[发明专利]IgG－IgM聚合物及其聚合方法

权利要求书

1.一种IgG－IgM聚合物，其特征在于：所述IgG－IgM聚合物符合通式（1）所示，

                      （1）；

式中，当A是IgG免疫球蛋白时，B是IgM免疫球蛋白；当A是IgM免疫球蛋白时，B是IgG免疫球蛋白；n＝10～1000。

2.一种IgG－IgM聚合物的聚合方法，其特征在于：主要由下列步骤组成：

第一步、将IgM免疫球蛋白溶于pH值为7.2的磷酸盐缓冲液中得到浓度为2mg/ml的IgM免疫球蛋白缓冲液，然后装入透析袋中，在2～8℃条件下，pH值为7.2的磷酸盐缓冲液中透析8～15小时；同时将IgG免疫球蛋白溶于pH值为7.2的磷酸盐缓冲液中得到浓度为2mg/ml的IgG免疫球蛋白缓冲液，然后装入透析袋中，在2～8℃条件下，pH值为7.2的磷酸盐缓冲液中透析8～15小时；

第二步、分别移出第一步中透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液和透析后的IgG免疫球蛋白缓冲液，然后分别向所述透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液和透析后的IgG免疫球蛋白缓冲液中加入N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）丙酸酯的无水乙醇溶液；其中，所述透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液中的IgM免疫球蛋白与所述N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）丙酸酯的无水乙醇溶液中的N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）丙酸酯两者之间的摩尔比为20:1；所述透析后的IgG免疫球蛋白缓冲液中的IgG免疫球蛋白与所述N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）丙酸酯的无水乙醇溶液中的N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）丙酸酯两者之间的摩尔比为20:1；

所述透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液中的IgM免疫球蛋白与所述N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）丙酸酯的无水乙醇溶液中的N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）丙酸酯反应生成的产物为IgM-SPDP，其结构如式（2）所示，得到IgM免疫球蛋白初聚液：

             （2）；

所述透析后的IgG免疫球蛋白缓冲液中的IgG免疫球蛋白与所述N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）丙酸酯的无水乙醇溶液中的N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）丙酸酯反应生成的产物为IgG-SPDP，其结构如式（3）所示，得到IgG免疫球蛋白初聚液；

              （3）；

第三步、分别对第二步得到的IgM免疫球蛋白初聚液和IgG免疫球蛋白初聚液离心分离，得到的上清液分别用pH值为7.2的磷酸盐缓冲液于10⁴超滤膜上超滤去除没有参加反应的N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）丙酸酯得到IgM免疫球蛋白初聚液的过滤液和IgG免疫球蛋白初聚液的过滤液；

第四步、向第三步得到的IgG免疫球蛋白初聚液的过滤液中加入与其浓度相等的二硫苏糖醇溶液，使得IgG免疫球蛋白初聚液的过滤液中的IgG-SPDP与二硫苏糖醇进行还原反应，其产物的结构如式（4）所示，得到IgG免疫球蛋白初聚液的还原液，然后用pH值为7.2的磷酸盐缓冲液透析8～15小时去除没有参加反应的二硫苏糖醇得到IgG免疫球蛋白还原液；所述IgG免疫球蛋白初聚液的过滤液与所述二硫苏糖醇溶液两者之间的体积比为20:1，所述二硫苏糖醇溶液是二硫苏糖醇溶于pH值为4.0～5.0的醋酸盐缓冲液而得；

              （4）；

第五步、将第四步得到的IgG免疫球蛋白还原液和第三步得到的IgM免疫球蛋白初聚液的过滤液装入透析袋中并混合均匀，在2～8℃条件下，反应15～24小时. 然后于pH值为7.2的磷酸盐缓冲液中透析8～15小时得到IgG－IgM免疫球蛋白聚合物原液，其中，所述IgM免疫球蛋白和IgG免疫球蛋白两者之间的摩尔比为1:1；

第六步：提纯

向第五步得到的IgG－IgM聚合物还原液中加入与其体积相等，且pH值为7.6的25℃硫酸铵饱和水溶液，置于2～8℃条件下反应1.5～2.5小时产生沉淀，然后采用离心分离的方式取出该沉淀；

第七步、将第六步得到的沉淀溶于pH值为7.4的0.05mol/l的Tris-HCl缓冲液，稀释至浓度为2mg/ml后装入透析袋中，然后在2～8℃条件下，置于pH值为7.4的0.05mol/l的Tris-HCl缓冲液中透析8～15小时即得IgG－IgM聚合物。

3.根据权利要求2所述的IgG－IgM聚合物的聚合方法，其特征在于：将所述第七步中得到的IgG－IgM聚合物与其体积相等的甘油混合均匀，然后与零下20℃条件下保存。