[发明专利]阜薯24脱毒苗快繁技术和培养基组成

权利要求书

1.                    阜薯24脱毒苗快繁技术和培养基组成

从正在生长的植株中，选取生长健壮，无病虫，具有本品种特征特性的植株，剪取带有茎尖的茎蔓，去掉叶片，剪成5cm长一段。

2.在流水中将茎段冲洗干净，放入一玻璃瓶中，加入水和洗衣粉少许，用手捂住上口进行震荡摇晃洗涤5-10秒。

3.再用蒸馏水冲洗干净，放在准备好的灭过菌的容器内。

4.在无菌室超净工作台上，用质量百分比为0.1%的升汞消毒10min，无菌水冲洗6遍，在解剖镜下，利用解剖针剥离茎尖，所剥茎尖为0.2mm，带1-2个叶原基，快速接种到诱导培养基中，诱导培养基采用MS为基本培养基，不加琼脂，做成液体培养基，在培养瓶中加入用脱脂棉花做成的滤纸条。

5.茎尖接种在滤纸条上，每瓶接种4个茎尖。

6.然后在25℃下，光照强度为2000Lx,光照时数为14h下培养，25天后转入成苗培养基中培养，待苗长到8cm高时进行病毒检测。

7.在 防 虫 条件下盆栽巴西牵牛，采用15x15的塑料花盆播种牵牛，每盆3株。

8.将成苗的试管苗分品系和编号直接嫁接在巴西牵牛上，每株牵牛嫁接一株试管苗。

9.试管苗至1-2片真叶时嫁接。

10.以待 测 样 品的茎蔓为接穗，巴西牵牛为砧木，在巴西牵牛的茎部(子叶以下)斜切。

11.将待检样品茎蔓切成3-5段，每段带有至少一个腋芽，去叶后将底端削成楔型，插入砧木的切口内，用封口膜扎紧，置26-32℃防虫网室内遮荫保湿2-3天。

12.嫁接好后采用上盖塑料小拱棚保湿，6-7天后成活，接去塑料膜，在25℃-27℃下常规管理。

13.发现有症状的去除。

14.直到20天后即可断定所获得试管苗是否脱除病毒。

15.淘汰感染株，剩下无毒株进行试管快速繁育。

16.每个样品重复3-5次。

17.同时设阳性对照、阴性对照。

18.嫁接10-15天后观察记载症状。

19.根据指示植物症状，确定病毒有无及种类。

20.在所有嫁接的指示植物中只要有一株表现典型症状，该样品即为阳性。

21.采用此法可以脱除甘薯六种常见病毒,甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV) 、甘薯轻斑驳病毒(SPMMV)、甘薯潜隐病毒（SPLV）、甘薯脉花叶病毒（SPVMV）、C-6、C-8。

22.切段繁殖时的茎节以1节即可,即一叶一芽.上端要与芽平,下端留1-2cm长度,斜插或者平放于培养基表面即可,3-4天生根,5-7天根系发育完全,8-10天茎叶生长达到高峰,15天即可剪切下一代,16-18天苗龄的小苗可以出瓶交货.在繁殖中光照要求一般,1000-2000lx均可生长良好。

23.培养温度以高温为好,温度可以提高到28-30℃以促进生根，后期可以降低培养温度到24-25℃ 。

24.   炼苗前要进行低温锻炼，从中温温室移到低温温室，锻炼一周，再洗苗栽苗，洗干净根部琼脂，栽入蛭石基质中，浇透水，上覆盖塑料薄膜保湿3-4天，在25℃下7天生根，然后撤去薄膜，常规管理，加强光照，一般15天即可移入温室生产核心原原种，如果4-6月炼苗可以在室内用育苗盘炼苗，保持通风和温度在20-30℃之间，经常叶面喷水，一周后即可成活移入温室，炼苗成活率在95%以上。

25.炼苗驯化采用ABT₃号生根粉20-30ppm灌根促使根系活化，生根快，炼苗成活率达到95%以上。

26.在10-14℃低温下保存试管苗，可有效延缓保存时间,一般保存半年,加入延缓剂CCC，B9等保存时间可以延长到8个月。