[发明专利]大水榕、小水榕、尖叶榕、燕尾榕离体快繁体系构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，尤其是一种用组织培养快速提高大水榕、小水榕、尖叶榕、燕尾榕快速繁殖的方法。 

背景技术

水榕是非常典型的观赏水草，品种有大水榕、小水榕、尖叶榕、燕尾榕等；大水榕叶片呈倒卵形，株高能达30cm。小水榕叶片呈卵圆形，植株最高只有10cm。燕尾榕叶片较狭长，株高能达20cm。尖叶榕植株比较细小，叶片也较狭长，株高约10-15cm。水榕形状优美，由于叶片坚硬，食草鱼类不会啃食，作为前景水草效果颇佳；水榕还适合在陆生动物饲养箱内种植，例如龟类等。但是多数水榕品种因其雌雄异株且籽株胎生，很难获得正常繁育的种子，常以无性繁殖为主，通过根茎侧芽分蘖而形成新的植株，繁殖速率极低，且受环境和季节限制。这就导致我国的高档观赏水草种苗稀缺，依赖于进口，其价格极高，制约了市场的发展。 

发明内容

本发明的目的是提供一种能大幅提高大水榕、小水榕、尖叶榕、燕尾榕的繁殖速度，且不受环境和季节的影响，易于推广的四种水榕离体快速繁殖体系构建方法。 

实现发明目的技术方案如下： 

大水榕、小水榕、尖叶榕、燕尾榕快繁体系的构建方法，包括如下步骤：外植体的选择与消毒，不定芽的诱导，继代增殖，生根培养、试管苗移栽。 

所述外植体的选择与消毒：选取健壮的上述四种水榕腋芽或者由腋芽新生出来的侧芽为外植体，在无菌条件下进行消毒； 

所述的大水榕、小水榕外植体依序经过不定芽诱导培养、继代培养后获得试管苗；所述的燕尾榕、尖叶榕外植体依序经过不定芽诱导培养、继代培养及生根培养后获得试管苗，所述诱导培养、继代培养及生根培养均在温度为25±1℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为20μmol/(m²·s)，湿度为60±10％的条件下进行。 

本发明快繁体系的构建方法中所所涉及到的各种培养基的配制如下： 

不定芽的诱导培养基为： 

①大水榕：MS+6-BA 5mg·L^-1+NAA 1mg·L^-1； 

②小水榕：MS+6-BA 3mg·L^-1+NAA 1mg·L^-1； 

③尖叶榕：MS+6-BA 4.5mg·L^-1+NAA 1.5mg·L^-1； 

④燕尾榕：MS+6-BA 4.5mg·L^-1+NAA 1.5mg·L^-1

继代培养基为： 

①大水榕、尖叶榕、燕尾榕：MS+6-BA 2mg·L^-1+NAA 0.2mg·L^-1

②小水榕：MS+6-BA 3mg·L^-1+NAA 0.3mg·L^-1

尖叶榕生根培养基为：MS培养基 

燕尾榕生根培养基为：MS+6-BA 0.1mg·L^-1+NAA 1.0mg·L^-1。 

以上每升MS培养基中均含有6-8g的琼脂，20g的蔗糖，并且用1mol/L NaOH或1mol/LHCl调pH至6.0，培养基经高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20分钟。 

本发明与已有技术相比，其有益效果体现在： 

(1)本发明提高了大水榕、小水榕、尖叶榕、燕尾榕的繁殖系数，缩短了培养时间，且能提高四种水榕试管苗的质量； 

(2)本发明不受季节和环境的影响，适合于全年繁殖，可大批供应种苗； 

(3)本发明大水榕、小水榕试管苗的培养过程中，能自然生根，不需要转接到生根培养基中；尖叶榕和燕尾榕在继代增殖的过程中生根率较低，但转移到生根培养基中后生根率达91.23％及以上； 

(4)本发明在试管苗移栽时，不需要炼苗，采用直接出瓶的方法，将试管苗移栽入土，简化了程序，降低了成本。 

具体实施方式

现通过下述优选的实施方式对本发明做进一步的说明。 

(1)选取健壮的大水榕、小水榕、尖叶榕、燕尾榕健壮的腋芽或者由腋芽新生出来的侧芽为外植体，洗衣粉洗净表面后经流水冲洗，在超净工作台上先用75％的酒精消毒15-30秒后再用0.1％的HgCl₂消毒5-8分钟，再用无菌水冲洗5-6次。