[发明专利]马流感病毒核蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及单克隆抗体，尤其涉及马流感病毒NP单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，本发明还涉及该马流感病毒NP单克隆抗体在制备检测或诊断马流感病毒的试剂中的应用，属于马流感病毒的检测领域。

背景技术

马流感(Equine influenza，EI)是由马流感病毒(Equine influenza virus，EIV)引起马属动物的急性呼吸性疾病，由于其恢复期长、治疗费用昂贵，给养马业带来了极大的经济损失(REEVE-JOHNSON L.Equine influenza in Australia[J].Vet Rec，2007，161：635.)。因此，建立一种快速、有效的检测EI的方法对其早期预防和控制极为重要。马流感病毒核蛋白(Nucleoprotein，NP)具有种群和型特异性，是保守的结构蛋白，在病毒进化中变异率极低，对于易发生变异的流感病毒的诊断具有重要的应用价值。单克隆抗体在检测中以其高特异性、准确性和有效性备受人们青睐。故利用针对NP的单克隆抗体建立起来的检测技术广泛应用于流感病毒的诊断，尤其是多亚型和高突变的禽流感病毒(Avain influenza virus，AIV)。deBore等仅利用一株抗NP单抗建立的双抗体夹心ELISA方法和双抗体夹心阻断ELISA可以分别从病原水平和血清水平检测人、禽和马等不同动物来源的各亚型流感病毒(SIEBINGA J T and BOER G F D.Influenza A viral nucleoprotein detection in isolates from human and various animal species[J].Arch Virol，1988，100：75-87；deBOER G F，BACK W and OSTERHAUS A D M E.An ELISA for detection of antibodies against influenza A nucleoprotein in humans and various animal species[J].Arch Virol，1990，115：47-61.)。2008年Yang M等运用流感病毒的NP单抗发明了一种快速检测针对AIV的探针，此单抗与NP结合后能被免疫荧光法、免疫组化法和免疫噬菌斑法展现出来(YANG M，BERHANE Y，SALO T，et al.Development and application of monoclonal antibodies against avian influenza virus nucleoprotein[J].J Virol Methods，2008，147：265-274.)。而EI方面，尤其是中国国内，基于EIV抗NP单抗建立起的检测方法鲜有报道。

与其它A型流感病毒一样，EIV极易变异，但是NP作为其重要的结构蛋白，却相当保守。应用单抗研究发现，所有不同动物来源的病毒株都有一个共同的抗原表位，针对此表位的单抗具有型特异性，利用该表位的单抗可检测不同动物来源的流感病毒，正如deBore等建立的双抗体夹心ELISA和双抗体夹心竞争ELISA。同时世界动物卫生组织(OIE)指出，在无分离病毒的实验室条件时，可采用EIV NP单抗进行抗原捕捉ELISA直接检测鼻腔分泌物中的EIV(COOK R F，SINCLAIR R and MUMFORD J A.Detection of influenza nucleoprotein antigen in nasal secretions from horses infected with A/equine influenza(H3N8)viruses[J].J Virol Methods，1988，20：1-12.LIVESAY G J，O′NEILL T，HANNANT D，et al.The outbreak of equine influenza(H3N8)in the United Kingdom in 1989：diagnostic use of an antigen capture ELISA[J].Vet Rec，1993，133：515-519.)。因此，一种快速有效的诊断技术对于EIV的预防控制和流行病学研究极为重要。目前国内常用的检测EI的方法有病毒的分离、血凝血凝抑制试验、RT-PCR等，但进行大规模检测比较困难，应用也局限于专业实验室，很难在基层推广使用。

发明内容

本发明目的之一是提供一种抗马流感病毒NP单克隆抗体；