[发明专利]金黄色葡萄球菌肠毒素B的功能表位、与其特异性结合的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了4种SEB蛋白的功能表位、与这个表位特异性结合的单克隆抗体及其在治疗SEB诱导的中毒性休克综合症中的应用。 

背景技术

革兰阳性(G)菌脓毒症的发病率逐年上升，其中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是烧伤创面感染和急性肝功能衰竭的重要病原菌。由于其致病因素复杂、耐药性不断增强，特别是中间型抗万古霉素金黄色葡萄球菌的出现，金黄色葡萄球菌感染所致脓毒症的防治已成为现代创伤外科和危重病医学面临的棘手难题之一。近年发现，造成医院感染的耐青霉素金黄色葡萄球菌，80％以上产生金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal Enterotoxin)。个别医院分离株几乎100％产肠毒素。金黄色葡萄球菌肠毒素，尤其是肠毒素B(Staphylococcal Enterotoxin B，SEB)因其“超抗原”特性以及在中毒性休克综合征发病中的特殊意义而倍受关注。 

SEB属于超抗原家族，这是一类具有多种免疫活性的蛋白分子。与普通抗原相比，细菌毒素超抗原有显著不同的特点：只需极低浓度(1-10ng/ml)即可刺激强烈的初次免疫应答，可激活的T淋巴细胞数量比普通抗原多达10³-10⁵倍；不经抗原提呈细胞(Antigen-presenting cell，APC)加工处理，可以完整的蛋白分子形式直接与抗原提呈细胞膜上的MHC II类分子及T细胞受体(T cell receptor， TCR)Vβ区特异性结合，刺激T细胞增殖；结合部位不在抗原肽结合的沟槽内，而在沟槽外；T细胞对超抗原的反应不受MHC 1I类分子的限制等。SEB可直接与MHC II类分子及TCRVβ链结合(Swaminathan S，Furey W，Pletcher J and Sax M.Crystal structure of staphylococcal enterotoxin B，a superantigen.Nature 1992；359：801-6)，刺激机体T细胞大量增值，从而释放大量的细胞因子。TCRVβ与SEB结合后，引起T细胞大量扩增并释放过量细胞因子，如IL-2，IL-6，TNF-β，INF-γ和TNF-a，这些细胞因子的过量扩增导致T细胞衰竭，并引发严重的中毒性休克症状。 

SEB是一种细菌外毒素，为单一多肽链，耐酸，耐热。在沸水中，几分钟不变性，在冰点能保存一年以上。编码SEB的entB基因由1709个碱基对组成(Shafer WM，Iandolo JJ.Chromosomal locus for staphylococcal enterotoxin B.Infect Immun 1978；20：273-8)。起始密码子ATG位于244bp处，TAG终止密码在在1042bp处，开放阅读框架共798bp，编码266个氨基酸。分子量约为28366道尔顿。