[发明专利]一种农杆菌介导的大豆离体组织培养方法

权利要求书

1.一种农杆菌介导的大豆离体组织培养方法，包括步骤：

将含重组载体的农杆菌与消毒后的大豆在发芽培养基上发芽1～4天的大豆子叶节外植体共侵染，在含有α-硫辛酸的共培养培养基中共培养3～5天，将大豆子叶节外植体转入含有筛选剂的固体芽诱导培养基上诱导芽的生长，然后转移到芽伸长培养基中培养至芽伸长为止，最后转移至生根培养基中生根。

2.根据权利要求1所述的农杆菌介导的大豆离体组织培养方法，其特征在于，所述的大豆品种为大豆粤春04-5、大豆粤春03-3或大豆黑农37。

3.根据权利要求1所述的农杆菌介导的大豆离体组织培养方法，其特征在于，所述的共培养培养基的组成为：以1/10B5培养基为基本培养基，添加3％蔗糖、20mmol/L 2-(N-吗啉)乙烷磺酸、0.45％琼脂、1.7mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.25mg/L赤霉酸和200μmol/L乙酰丁香酮。

4.根据权利要求1所述的农杆菌介导的大豆离体组织培养方法，其特征在于，所述的固体芽诱导培养基的组成为：以B5培养基为基本培养基，添加3％蔗糖、20mmol/L 2-(N-吗啉)乙烷磺酸、0.8％琼脂和1.7mg/L 6-苄氨基嘌呤。

5.根据权利要求1所述的农杆菌介导的大豆离体组织培养方法，其特征在于，所述的筛选剂为草丁膦。

6.根据权利要求1所述的农杆菌介导的大豆离体组织培养方法，其特征在于，所述的芽伸长培养基的组成为：以MS培养基为基本培养基，添加1mg/L玉米素、0.1mg/L吲哚乙酸、0.5mg/L赤霉素、50mg/L谷氨酰胺、50mg/L天冬酰胺、3％蔗糖和0.7％琼脂。

7.根据权利要求1所述的农杆菌介导的大豆离体组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基的组成为：以MS培养基为基本培养基，添加0.5mg/L萘乙酸、2％蔗糖和8g/L琼脂；或者，以MS培养基为基本培养基，添加0.1mg/L吲哚乙酸、2％蔗糖和8g/L琼脂。

8.根据权利要求1所述的农杆菌介导的大豆离体组织培养方法，其特征在于，所述的农杆菌菌株为LBA4404或EHA101。

9.根据权利要求1所述的农杆菌介导的大豆离体组织培养方法，其特征在于，每升共培养培养基中α-硫辛酸的添加量为25mg-50mg。

10.根据权利要求1所述的农杆菌介导的大豆离体组织培养方法，其特征在于，所述的重组载体为载体pTF102或载体pSOY22；所述的载体pTF102含有报告基因β-葡萄糖苷酸酶和草丁膦筛选标记基因；所述的载体pSOY22含有草丁膦筛选标记基因和二个抗虫目的基因，所述的二个抗虫目的基因分别为胰蛋白酶抑制剂基因和几丁质酶基因。