[发明专利]一种融合人白细胞介素28B及其制备方法

权利要求书

1.一种融合蛋白，是人血清白蛋白和λ干扰素连接而成的融合蛋白。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述人血清白蛋白位于所述λ干扰素的N端；

和/或，所述λ干扰素为人白细胞介素28B；

和/或，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.权利要求1或2所述融合蛋白的编码基因。

4.根据权利要求3所述的编码基因，其特征在于：所述编码基因为如下1)或2)或3)所示：

1)其核苷酸序列是SEQ ID NO：2所示DNA分子；

2)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；

3)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上的同源性且编码所述蛋白的DNA分子。

5.含有权利要求3或4所述编码基因的重组载体、重组菌、转基因细胞系、重组病毒或表达盒。

6.根据权利要求5所述的重组载体，其特征在于：所述重组载体是将SEQ ID NO：2所示基因插入表达载体pPinkα-HC的多克隆位点得到的。

7.根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于：所述重组菌是将SEQ ID NO：2所示编码基因导入宿主酵母菌中得到的；所述宿主酵母菌具体为毕赤酵母，再具体为如下四种菌株中的至少一种：ade2蛋白酶缺陷型毕赤酵母、ade2/pep4蛋白酶缺陷型毕赤酵母、ade2/prb1蛋白酶缺陷型毕赤酵母和ade2/prb1/pep4蛋白酶缺陷型毕赤酵母；

和/或，所述SEQ ID NO：2所示编码基因是通过权利要求5或6所述重组载体导入的。

8.一种制备权利要求1所述融合蛋白的方法，包括如下步骤：

1)将权利要求7所述的重组酵母菌预培养至对数生长期；

2)用甲醇对步骤1)得到的菌进行诱导培养，诱导培养完毕，收集上清液，即得到所述融合蛋白。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述甲醇占诱导培养体系的1.0％-4.0％(体积百分比)，具体为2％-4％或2％-3％；

所述步骤2)中，所述诱导培养的时间为48h-72h，具体为72h。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述预培养包括如下步骤：将权利要求7所述的重组酵母菌接种于用于培养酵母菌的培养基中，培养至培养体系的OD600为5.0～6.0；

所述步骤2)中，在所述用甲醇进行诱导之前，包括如下步骤：将步骤1)得到的菌体重悬于用于诱导酵母菌的培养基中，再培养10-14h；

所述用于培养酵母菌的培养基为用于培养毕赤酵母菌的培养基，具体为BMGY培养基；所述用于诱导酵母菌的培养基为用于诱导毕赤酵母菌的培养基，具体为BMMY培养基；

所述步骤1)和所述步骤2)中，所述培养的温度为30℃。