[发明专利]5-羟甲基胞嘧啶的应用及在小鼠胚胎中分布的检测方法

权利要求书

1.一种5-羟甲基胞嘧啶的应用，其特征在于，用作受精卵雄核标记物或雌核标记物。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述核标记物是指标记5-羟甲基胞嘧啶在雄核或雌核中的含量。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述标记5-羟甲基胞嘧啶在核中的含量是指从PN0期到PN5期，所述5-羟甲基胞嘧啶在雄核中的含量逐渐增多，所述5-羟甲基胞嘧啶在雌核中的含量逐渐减少。

4.一种5-羟甲基胞嘧啶在小鼠胚胎中分布的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)、小鼠自然受精或体外受精，提取小鼠胚胎；

(b)、小鼠胚胎的染色；

(c)、显微镜观察染色或进行定量分析。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述自然受精提取小鼠胚胎是雌雄小鼠进行交配，选取见栓的雌鼠，直接提取受精卵，放入M2培养液中洗涤后放在M16液中，置于CO₂培养箱，于37℃培养；

所述体外受精提取小鼠胚胎是取未交配的雌鼠的未受精的卵和雄鼠的精子，在体外使二者结合进行受精，放入HTF培养液中，置于CO₂培养箱，于37℃培养。

6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述染色包括以下步骤：

(a)、将小鼠胚胎在4％PDF溶液中室温固定13～18分钟；

(b)、采用1XPBS溶液中进行清洗，并用0.2％Triton X-100室温处理13-18分钟

(c)、采用PBST进行清洗，并用2N HCl室温处理30分钟，之后立即用0.1M、pH为8.0的Tris-HCl处理15分钟，其中所述PBST溶液为含有0.05％ Tween20的1XPBS溶液；

(d)、采用PBST进行清洗，立即用含有1％ BSA的PBST溶液中进行封闭1小时；

(e)、将小鼠胚胎转入抗5mc/5hmc的抗体中，于37℃放置0.5～1小时。

7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述定量分析是指采用ImageJ软件分析5hmc在小鼠胚胎原核期中雄核和雌核中的含量变化情况。