[发明专利]一种瘦肉精的快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种瘦肉精的快速检测方法。本发明涉及一种将待检样品置于碱性条件下的高锰酸钾中，观查高锰酸钾颜色的变化，当出现黄绿色至翠绿色时表明样品中含有瘦肉精。本发明方法适合瘦肉精的快速检测，包括动物血液或尿液或肉样或其他待检溶液中的瘦肉精的快速检测。

背景技术

瘦肉精(盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺，俗称瘦肉精)，属β-兴奋剂类激素，近年来被非法添加到饲料中以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物生长，易在动物组织中残留而给消费者带来危害。

目前瘦肉精残留常用的检测方法有色谱分析法和免疫学方法。

国标法检测盐酸克伦特罗的方法为：用酶联免疫法(ELISA)筛选、高效液相色谱法(HPI-C)定量、气质联机法(GC-MS)确证和定量。其中国标规定的酶联免疫检测方法为：微孔板包被有针对克伦特罗IgG(抗体)的包被抗体。克伦特罗抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标记物、标准或试样溶液。克伦特罗与竞争性酶标记物竞争克伦特罗抗体，没有与抗体连接的克伦特罗标记酶在洗涤步骤中被除去。将底物(过氧化尿素)和发色剂〔四甲基联苯胺)加入到孔中孵育，结合的标记酶将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色。检出限为：0.5μg/kg。

酶联免疫方法：常用的为竞争性酶联免疫法，原理为：包被抗原被固定在酶标板孔壁上，样品中的盐酸克伦特罗与包被抗原竞争结合抗体中有限量的结合位点。每孔中抗体的结合位点数相同，当样品中盐酸克伦特罗浓度低时，更多的抗体位点与包被抗原结合，更多的抗体被固定在酶标板上，会与更多的酶标二抗反应，加底物、显色液、终止液后用酶标仪测定含量。

色谱分析法灵敏、准确，但由于复杂的仪器设备和繁琐的过程，不适合现场监控和大量样本筛查，仅以一些重要的卫生防疫和质量检验监督部门采用为主，通常对初步检测为阳性的样品确认时采用。

免疫学方法目前主要包括酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金检测法，前者存在检测时间长、对操作人员专业要求高等缺点；后者由于检测时间短、操作简单等优点目前被广泛应用于瘦肉精的现场检测，但仍存在检测成本高、假阳性现象较多等缺陷。

发明内容

本发明的目的在于客服现有技术中存在的上述缺点，提供一种操作简便、灵敏度高、成本低、现象明显的瘦肉精的快速检测方法，本发明方法可以快速检测牲畜体内的瘦肉精的含量，检测下限可达0.5ng/mL(0.5ppb)。本发明瘦肉精的检测是将待检样品置于碱性条件下的高锰酸钾中，观察高锰酸钾颜色的变化，当出现黄绿色至翠绿色时表明样品中含有瘦肉精。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

一种瘦肉精的快速检测方法，将待检样品置于碱性条件下的高锰酸钾中，观查高锰酸钾颜色的变化，当出现黄绿色至翠绿色时表明样品中含有瘦肉精。

将待检样品置于碱性条件下的高锰酸钾中，使用的高锰酸钾干粉与碱干粉混合成混合物，或者使用的是高锰酸钾与碱的水溶液。

使用的高锰酸钾干粉与碱干粉混合成混合物时，首先将碱性材料干燥粉末与高锰酸钾(KMnO₄)干燥粉末按70～90∶1的比例混合，将待检样品置于碱与高锰酸钾的混合物中，即将待检样品置于碱性条件下的高锰酸钾中，观查高锰酸钾颜色的变化，当出现黄绿色至翠绿色时表明样品中含有瘦肉精。

使用的是高锰酸钾与碱的水溶液时，首先将碱性材料配制成浓度为0.07～0.09g/mL的溶液，然后将高锰酸钾配制成浓度为0.001g/mL的溶液，吸取少量待检样品溶液置于载玻片或其他非吸水板上，加入同样数量的碱溶液，振荡摇匀，再加入同样数量的高锰酸钾溶液，振荡摇匀，观察颜色变化，当出现黄绿色至翠绿色时为表明样品中含有瘦肉精，当出现红紫色时，表明样品不含瘦肉精。

高锰酸钾检测瘦肉精的原理：

高锰酸钾(KMnO₄)氧化苯胺，自身颜色发生变化。

苯酚、苯胺与瘦肉精(克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺)结构相似，因此还原高锰酸钾的原理相同，均为苯环上连接的胺基或羟基氧化KMnO₄生成绿