[发明专利]一种抗Her2抗体-白细胞介素2融合蛋白及其用途

说明书

技术领域

本发明属于医学肿瘤学技术领域，具体涉及一种抗Her2抗体与白细胞介素2的融合蛋白及其用途。

背景技术

抗体的天然效应功能很弱，循环中高浓度IgG的存在可干扰抗体与效应细胞表面FcR的结合。因此，增强抗体的效应功能一直是抗体研究领域的重要方向。自80年代起，国内外先后开展了一系列携效应分子的抗体的研究工作，以试图增强抗体的效应功能。80年代后期，免疫调节因子增强细胞免疫反应和抗独特型免疫反应在肿瘤免疫治疗中的作用受到了极大的关注。白介素2(IL-2)是免疫反应中的重要介导分子，也是已知最强有力的抗肿瘤细胞因子之一，具有广泛的生物学活性。自Rosenberg等人报道IL-2在肾细胞癌和黑色素瘤临床治疗中的抗肿瘤效应后，采用IL-2和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)联合治疗恶性肿瘤在临床上获得了广泛的应用。然而，IL-2以及其它细胞因子的全身用药常在远离肿瘤部位的循环中产生高浓度，而在肿瘤局部的微环境中却达不到治疗的最佳浓度。由于IL-2的全身用药可导致致命的副作用，这使IL-2的治疗剂量大受限制。

人们迅速将注意力集中到如何提高细胞因子在肿瘤局部的有效浓度，从而避免全身性毒性反应。对于可触及的肿瘤，将细胞因子直接注射到肿瘤局部是一个解决的办法，但对于肿瘤微小转移灶的治疗，直接注射的方法显然不可行。采用基因转移的方法，将重组细胞因子导入病人自身肿瘤细胞或纤维母细胞，通过基因修饰的细胞分泌细胞因子以诱导局部炎症反应，在某些情况下可产生全身性抗肿瘤免疫反应。然而，恶性肿瘤患者往往经历了放疗、化疗或骨髓、外周血干细胞移植，大剂量化疗可导致严重的免疫抑制。特别是在异基因骨髓移植时为防止移植物抗宿主病(GVHD)而应用强力T细胞抑制剂环胞素A(cyclosporin A)后，使这种依赖CTL反应的免疫治疗难以奏效。此外，该方法为病人特异性的，需要采用病人自身的肿瘤细胞，在体外进行基因修饰，然后再回输给病人，操作复杂，耗费时间，费用昂贵。迄今为止，可评价的临床资料有限。一些研究者开始尝试利用抗体靶向性地传递免疫调节因子，使细胞因子的免疫治疗策略与增强抗体的抗肿瘤效应结合起来，以在肿瘤局部获得高浓度的细胞因子，有效地刺激细胞免疫反应，从而清除肿瘤。从理论上来说，与细胞因子基因治疗的方案相比，抗体-细胞因子融合蛋白(免疫细胞因子)的制备技术较简便，不受病人特异性的限制。而与免疫毒素相比，采用嵌合抗体或人源化抗体融合人源性毒性蛋白，则可有效地降低免疫原性。近年来，研究者构建了几种靶向不同肿瘤相关抗原的免疫细胞因子。动物实验表明，抗体细胞因子融合蛋白的抗肿瘤效应显著优于等剂量抗体与细胞因子的混合应用。目前已有两种免疫细胞因子已进入临床试验阶段

ErbB-2是具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，属于I型生长因子受体家族成员。ErbB-2在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、肺癌等多种上皮细胞来源的恶性肿瘤中过表达，而在正常组织中表达水平很低。因此，ErbB-2是肿瘤免疫治疗的理想靶分子。1998年美国FDA批准人源化抗ErbB-2单抗用于ErbB-2过表达乳腺癌的临床治疗，成为继手术、放疗、化疗和内分泌治疗后新的乳腺癌治疗手段。然而单独应用治疗晚期乳腺癌，作为二线用药的总有效率仅为15％，作为一线用药的总有效率为23％。但是，并非所有Her2高表达的患者可从抗体治疗中受益，其中一半以上的患者对Trastuzumab治疗不敏感，且在用药一年后，较大比例的Trastuzumab治疗有效的患者出现耐药，导致治疗失败。Trastuzumab治疗无效及耐药的机制尚不清楚，但研究表明，发展具有不同作用机制的新型靶向Her2的药物，将填补现有产品治疗谱的空白，为更多的患者提供新的用药选择。

采用基因工程方法，已成功设计、构建含抗ErbB-2 scFv、人IgG1的Fc段、IL-2的融合蛋白(HF)。HF保留了识别ErbB-2抗原的能力及IL-2的生物学活性。然而HF存在如下缺陷：1、生物学活性低；2、表达水平低，不能用于规模化生产。这些缺陷使HF的临床应用受到了很大的限制，急需对HF进行分子改造以克服规模化生产的瓶颈，使HF能应用于Her2阳性的乳腺癌的临床治疗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗Her2抗体-白细胞介素2融合蛋白。

本发明的目的还在于提供一条Linker的氨基酸序列，所述Linker 2的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.3所示，其优越之处为可显著提高融合蛋白在哺乳动物细胞表达系统中的产量及生物学活性。