[发明专利]一种含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取物、制备方法及应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取物制备方法，本发明还包括本发明的提取物在镇痛方面的应用。

背景技术：

吴茱萸碱(evodiamine，EVO)和吴茱萸次碱(rutaecarpine，RUT)是中药吴茱萸的主要活性成分，其具有降压、舒血管、抗过敏、抗炎、镇痛等作用。EVO和RUT的VR₁激动作用，可促进神经递质(CGRP、P物质等)的合成和释放，试验证实高剂量的EVO能使小鼠离体回肠神经元脱敏发挥镇痛作用，推测EVO的镇痛机制可能与辣椒素类似，通过与外周感觉神经传入纤维上的VR₁结合，激活与之偶联的膜离子通道，使Ca²⁺通道开放，胞质中Ca²⁺浓度升高，兴奋感觉神经，促进神经元及其纤维释放神经递质，进而使其从外周和中枢神经细胞中逐渐耗竭排空，阻断疼痛的传导，从而发挥镇痛作用。除了上述的镇痛机制，EVO与RUT还能下调环氧合酶-2(COX-2)的表达或者抑制COX-2的活性，抑制炎性介质的释放，缓解炎性疼痛。因此，EVO与RUT可能是一类针对多靶点的镇痛药物。

中国专利CN 1931271A专利提供了一种吴茱萸提取物及其制备方法、药物组合物和用途，但其制备方法不包含且不能推断出本发明提取物的制备方法。

发明内容：

本发明提供一种含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取物制备方法。

本发明还发现本发明的含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取物具有镇痛作用，为此，本发明提供一种含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱提取物的医药新用途。

本发明的含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取物中吴茱萸碱和吴茱萸次碱比例在1-10：1-5范围内。

上述比例优选提取物中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的比例为1.3∶1-1.8∶1。

本发明的含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取物纯度在50％以上。

本发明提取物从天然药物例如芸香科植物吴茱萸、疏毛吴茱萸和石虎等或其炮制品中提取获得。

EVO和RUT是一类极度难溶的化合物，几乎不溶于水和多数有机溶剂，口服吸收困难，我们的研究表明灌胃给予SD大鼠500mg·kg^-1的EVO单体，血药浓度峰值(C_max)为49.0±19.0ng·mL^-1，生物利用度仅为0.1％。灌胃给予SD大鼠40mg·kg^-1的RUT单体，血药浓度值低于最低检测限(2ng·mL^-1)。而在Wistar品系的大鼠(自发性高血压大鼠)连续18天灌胃给予40mg·kg^-1的RUT单体，最后一次给药后30min的血药浓度仅为2.4±3ng·mL^-1。因而，寻找更有效的EVO和RUT给药形式具有重要意义。本研究室发现特定比例的提取物较化学合成单体能明显改善EVO和RUT的吸收，增加二者的生物利用度，且呈现纯度依赖性。

本发明的提取物优选制备方法如下：

A、药材提取

将吴茱萸属原料(药材或炮制品)用乙醇溶液(含体积百分含量(下同)60％-90％的乙醇)、乙醇、甲醇等有机溶剂提取，得到提取液。

B、分段水沉

将上述提取液或浓缩后的提取液加入水后使醇的浓度下降并不低于33％，后离心取沉淀；

C、精制

将B所得的沉淀用醇重结晶，离心收集沉淀干燥后，即得不同纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱的组合物。

本发明的提取物可用于镇痛，治疗的疼痛包括糖尿病性神经疼痛、腰背痛、慢性肌肉骨骼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎等，但不限于此。

本发明提取物的制备方法工艺简单可控，成本低；可通过控制工艺因素制备不同纯度提取物；生产过程无污染，具有良好的生产和开发价值。

附图说明

图1是不同剂量吴茱萸提取物乳膏对不同时相小鼠舔后足累计时间的影响(均数±标准差，n＝8)，*P＜0.05；**P＜0.01v.s空白基质组；

图2是大鼠口服三种纯度吴茱萸提取物后EVO的药时曲线(均数±标准差，n＝6)；

图3是大鼠口服三种纯度吴茱萸提取物后RUT的药时曲线(均数±标准差，n＝6)；

图4是大鼠口服六种比例混合物后EVO的药时曲线(均数±标准差，n＝6)；

图5是大鼠口服六种比例混合物后RUT的药时曲线(均数±标准差，n＝6)；

具体实施方式：