[发明专利]一种利用喷雾干燥法制备抗仔猪腹泻卵黄抗体微胶囊的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种利用喷雾干燥法制备抗仔猪腹泻卵黄抗体微胶囊的方法。

发明背景

仔猪腹泻是引起仔猪死亡和生长受阻的主要因素之一，已经严重危害了我国养猪业的发展。引起仔猪腹泻的病原很多，主要有产肠毒素大肠埃希氏菌(ETEC)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、轮状病毒等。特异性卵黄抗体治疗和预防由细菌和病毒引起的肠道疾病，具有安全无残留、不产生抗药性、成本低和服用方便的优点，作为一类可替代抗生素的高效生物制剂在治疗和预防仔猪腹泻中的作用受到了国内外学者的关注。但传统方法制备得到的特异性卵黄抗体容易受到胃酸和胃蛋白酶的破坏，影响其功效。

目前，尚未见有关利用喷雾干燥法制备抗仔猪腹泻卵黄抗体微胶囊的研究和应用的文献报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种利用喷雾干燥法制备抗仔猪腹泻卵黄抗体微胶囊的方法，该方法制得的微胶囊可以保护卵黄抗体不受胃酸和胃蛋白酶的破坏，使卵黄抗体能够到达肠道并释放出来发挥功效。

本发明利用喷雾干燥法制备抗仔猪腹泻卵黄抗体微胶囊的方法是按以下工艺步骤进行操作：

1)、用含K88、K99和987P三种血清型，且每一种菌的菌数至少30亿CFU/mL的大肠杆菌灭活苗和猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻及轮状病毒三联弱毒苗免疫健康鸡群各三次，每次免疫间隔20天，两种免疫间隔10天，最后一次免疫隔10天后收获高免卵；

2)、用0.1％的新洁尔灭浸泡高免卵，消毒30min，再用75％酒精进行蛋壳表面消毒，然后采集卵黄液，并采用水稀释法提取卵黄中的水溶性蛋白；

3)、再采用饱和硫酸铵法去除水溶性蛋白中的杂蛋白，获得高纯度的卵黄抗体，并将卵黄抗体浓度调至10mg/mL；

4)、将质量百分浓度为2～6％的明胶溶液、质量百分浓度为0.5～1％的海藻酸钠溶液及步骤3)获得的卵黄抗体按体积比为50∶50∶1混合，再加入终浓度为0.5～1％的吐温80，在温度50～70℃、搅拌速度1000～2000rpm及搅拌时间15～60min的条件下进行乳化制得成囊乳化液；

5)、将步骤4)获得的成囊乳化液采用喷雾干燥法制得微胶囊成品，喷雾干燥的条件为：进风温度160～180℃、进料速度5～15ml/min、干燥时间5～15s及出口温度60～80℃。

本发明方法采用喷雾干燥法与微胶囊成囊技术相结合，使制得的微胶囊可以保护卵黄抗体不受胃酸和胃蛋白酶的破坏，而且使卵黄抗体能够到达肠道并释放出来发挥功效，是一种可替代抗生素防治仔猪腹泻的高效环保生物制剂。

具体实施方式

下面对本发明方法作进一步的描述：

实施例1：

按以下工艺步骤制备抗仔猪腹泻卵黄抗体微胶囊：

(1).用含K88、K99和987P三种血清型、且每一种菌的菌数均在30亿CFU/mL以上的大肠杆菌灭活苗按1mL/只免疫200只健康鸡，共三次，每次间隔20天。在每次免疫大肠杆菌灭活苗后10天接着免疫猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻及轮状病毒三联弱毒苗，按0.5mL/只免疫，共三次，每次间隔20天。最后一次免疫隔10天后收获高免卵约250kg；

(2).用质量百分浓度为0.1％的新洁尔灭浸泡步骤(1)收获的卵，消毒30min，再用质量百分浓度为75％酒精进行蛋壳表面消毒，无菌条件下打开蛋壳，使卵清与卵黄分开，再将卵黄置于灭菌滤纸上滚动，吸掉残留卵清后刺破卵黄膜收集卵黄液。再用灭菌水将卵黄液做10倍稀释，搅匀，并调PH至5.5，静置过夜，再在4℃、转速为10000rpm/min离心30min，收集上清液；

(3).在步骤(2)收集的上清液中加入等体积的PBS(0.01mol/L，PH6.8)进行稀释，再加入饱和硫酸铵溶液，使其体积占总体积的1/2，再在4℃下静置1h，在4℃、转速为5000rpm/min离心20min，弃上清液。再用2倍步骤(2)中上清液体积的PBS(0.01mol/L，PH6.8)溶解沉淀，再加入饱和硫酸铵溶液，使其体积占总体积的1/3，再在4℃、转速为5000rpm/min离心20min，弃上清液。再用PBS(0.01mol/L，PH6.8)溶解沉淀，得到浓度为10mg/mL、纯度为88％的卵黄抗体约500ml。