[发明专利]抗牙鲆黏液免疫球蛋白的单克隆抗体及其制备方法有效
| 申请号： | 201110115977.4 | 申请日： | 2011-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN102199212A | 公开（公告）日： | 2011-09-28 |
| 发明（设计）人： | 战文斌;许国晶;绳秀珍;邢婧 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C07K16/42 | 分类号： | C07K16/42;C12N5/20;G01N33/577;C12R1/91 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 37201 | 代理人： | 王铎 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗牙鲆 黏液 免疫球蛋白 单克隆抗体 及其 制备 方法 | ||
1.一种抗牙鲆黏液免疫球蛋白的单克隆抗体，其特征在于：所述的单克隆抗体是由名称为：杂交瘤细胞JF-mIg，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC C201127，保藏日期为：2011年04月25日的杂交瘤细胞分泌的。
2. 一种如权利要求1所述的抗牙鲆黏液免疫球蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于所述的方法包括如下步骤：将牙鲆黏液经盐析结合柱层析法纯化得到牙鲆黏液免疫球蛋白；以纯化的牙鲆黏液免疫球蛋白为抗原免疫Balb/C小鼠；融合被免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞；经免疫学检测筛选方法，筛选出分泌抗牙鲆黏液免疫球蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞JF-mIg；其分泌的抗体即为抗牙鲆黏液免疫球蛋白的单克隆抗体。
3. 根据权利要求2所述的抗牙鲆黏液免疫球蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于所述的盐析结合柱层析法是将牙鲆黏液经饱和硫酸铵分步盐析后，依次经Sephacryl S-300凝胶过滤层析及DEAE Sepharose离子层析进一步纯化。
4. 根据权利要求2所述抗牙鲆黏液免疫球蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于所述的免疫学检测筛选方法是间接酶联免疫法和转印免疫印迹法。
5. 根据权利要求4所述的抗牙鲆黏液免疫球蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于所述的间接酶联免疫法是将细胞融合后所得的杂交瘤细胞培养上清液与纯化的牙鲆黏液免疫球蛋白于96孔酶标板中反应；继而加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体；405 nm工作波长测定各孔光吸收值，筛选抗牙鲆黏液免疫球蛋白的单克隆抗体，即杂交瘤细胞JF-mIg分泌的单克隆抗体。
6. 根据权利要求4所述的抗牙鲆黏液免疫球蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于所述的转印免疫印迹法是将杂交瘤细胞JF-mIg分泌的单克隆抗体与转移至硝酸纤维素膜的牙鲆黏液免疫球蛋白反应，确定该单抗的抗原决定簇位于分子量为72 kDa的牙鲆黏液免疫球蛋白的重链上。
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