[发明专利]一种水中缓释微生态菌剂的制备及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术和微生态制剂领域。

技术背景

枯草芽孢杆菌是一种成熟的微生态制剂，将其应用于水产养殖，能起到净化养殖水体，降低水产养殖的发病率，提高存活率等有益效果。目前市场上的枯草芽孢杆菌制剂均为其芽孢干粉，使用前必须先行活化，由于该菌株为好氧菌，浓度过高繁殖过快将迅速降低水中溶解氧，影响水产动物的生存，因此，投料浓度有一定的限制，且使用周期较短，在7～15天之间。本发明将提供一种在水中缓释的枯草芽孢杆菌微生态制剂，解决其投料浓度较低，使用周期较短的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可有效净化养殖水体、降低水产动物的发病率的水中缓释的微生态菌剂及其制备方法。

本发明制剂的制备方法：

1、枯草芽孢杆菌的制备

1.1培养基

斜面培养基(g/L)：营养琼脂20，pH7.0-7.2

种子培养基(g/L)：牛肉膏12，氯化钠5，MnSO₄0.5，pH7.0-7.2。

发酵培养基(g/L)：葡萄糖80～100，豆饼粉10～15，玉米淀粉5～7，(NH)₂SO₄4，K₂HPO₄8，CaCl₂2，pH7.0-7.2。

1.2培养条件

斜面培养：37℃恒温培养48h。

种子培养：从试管斜面接种一环至种子培养基，200rpm，37℃摇床培养16h。

发酵培养：将种子液以3～5％的接种量接种至发酵培养基，5L发酵罐，500rpm，37℃培养40～48h。

1.3枯草芽孢杆菌芽孢的收集

取发酵培养液，10000rpm离心5min收集芽孢，80℃鼓风干燥4h，得到芽孢粉末。

2、微胶囊的制备方法

2.1微胶囊评估指数

包埋率(encapsulated efficiency，EE)＝(投入的芽孢总量-溶液中未包埋的芽孢量)/投入的芽孢总量×100％

载菌量(Bacteria loading，BL)＝微胶囊中芽孢总量/微胶囊总质量×100％

评估指数(evaluating indicator，EI)＝(EE+BL)/2

2.2微胶囊的制备

将0.8g的明胶和1.5g的海藻酸钠混合后融于100ml蒸馏水，投入2％芽孢干粉充分混匀，通过2mm的锐孔，边搅拌边挤压滴入10％的氯化钙固化液，形成直径为3～5mm的微胶囊，其芽孢包埋率达到87％以上。

3、本发明制剂的应用效果

将本发明产品应用于河虾养值，其投料周期为60天，水体pH控制7.0～7.5之间，氨氮含量低于0.4mg/L，溶解氧高于3.0mg/L，河虾存活率为99％以上。起到了有效净化水体和降低发病率的作用。

附图说明：

图1海藻酸钠质量浓度对微胶囊的影响

图2明胶质量浓度对微胶囊的影响

图3CaCl₂质量浓度对微胶囊的影响

图4芽孢质量浓度对微胶囊的影响

具体实施方式

实施例1：枯草芽孢杆菌芽孢的富集培养

本发明所使用的枯草芽孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.3871，保藏日期2010年5月24日。将该菌从保存的斜面转接于新鲜斜面，于37℃恒温培养48h。从斜面接种一环至50ml种子培养基，37℃、200rpm摇床震荡培养16h。5L发酵罐中装入3L发酵培养基，以5％的接种量接入种子液，500rpm，37℃培养48h得到芽孢发酵液。将发酵液于10000rpm离心5min收集芽孢，80℃鼓风干燥4h，得到芽孢粉末作为微胶囊芯材。

实施例2：枯草芽孢杆菌微胶囊的制备

以明胶和海藻酸钠作为混合壁材，以枯草芽孢杆菌芽孢干粉作为芯材，以氯化钙作为固化液，采用锐孔凝固法制备微胶囊。研究了各个成分对微胶囊物理性能的影响。

1、海藻酸钠质量浓度对微胶囊制备的影响