[发明专利]一组新型的HRP5类似物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体而言涉及一组新型的具有广谱抗菌活性的HRP5类似物及其制备方法。

背景技术

自从青霉素发现以来，抗生素一直是人类治疗病原微生物感染的有力武器，但随着传统抗生素的滥用，越来越多的病原菌开始对传统抗生素产生耐药性，所以急需寻找-类全新的抗菌药物来替代抗生素进行使用。

阳离子抗菌肽(cationic antimicrobial peptides)是植物和动物产生的一般由12-50个氨基酸残基组成的阳离子型(富含精氨酸及赖氨酸)多肽，能够保护宿主不受外界病原微生物感染。阳离子抗菌肽的抗菌谱比传统抗生素宽，来自昆虫、猪、蛙以及人的阳离子抗菌肽不仅对革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌有抗菌作用，而且还具有抗真菌及抗病毒活性。传统抗生素通过消除微生物生长或生存必不可少的条件，如使酶变性，来达到杀菌的目的，但细菌只要一种基因突变后就可以抵抗此类抗生素的攻击。而阳离子抗菌肽则通过中和电荷的方法与细菌细胞膜相互作用，以此穿透杀死细菌，极大地减少了细菌产生耐药性的可能。但天然的阳离子抗菌肽并非完美无缺，部分抗菌肽对真核生物有一定的毒性，对病原物高杀灭活性的同时往往伴随着对真核生物的溶血作用。因此如何提高其活性并最大程度降低其毒性是目前抗菌肽药物开发的难点和希望所在。目前的研究主要将α-螺旋的两性抗菌肽作为研究对象，围绕阳离子氨基酸以及疏水性氨基酸数量及位置，对抗菌肽进行结构改造，如残基替换、截取天然抗菌肽的部分序列以及增加肽链的正电荷含量等，取得了较大进展。

富组蛋白(histidine rich protein，HRPs或histatins)是-类存在于灵长类动物腮腺和颌下腺分泌物中富含组氨酸的阳离子多肽。现已分离出至少12种人HRPs(HRP1-12)，其中HRP1、HRP3及HRP5是主要富组蛋白，占总HRPs的85％-90％，分别由38，32，24个氨基酸组成。HRP1和HRP3由不同的基因编码，HRP5是HRP3经蛋白酶水解的产物，包含在HRP3的N末端24个残基中。编码HRP1，3的基因已被测序且定位于人类第4号染色体q13上。现有研究表明：HRPs具有多种活跃的生物学功能，其抗微生物作用尤为重要，如抑制、杀灭变形链球菌和白色念珠菌等。

HRP5含有24个氨基酸残基，分子量为3037D。其氨基酸序列为Asp-Ser-His-Ala-Lys-Arg-His-His-Gly-Tyr-Lys-Arg-Lys-Phe-His-Glu-Lys-His-His-Ser-His-Arg-Gly-Tyr(SEQ ID NO：1)。Raj等学者认为HRP5抗白色念珠菌的特性与其氨基酸序列有关，他们分别将HRP5及其残基片段N16(1-16位氨基酸)、C16(9-24位氨基酸)、C14(11-24位氨基酸)、C12(13-24位氨基酸)、C10(15-24位氨基酸)和M10(7-16位氨基酸)分别与不同浓度的白色念球菌作用，检测其抗白色念球菌的能力。试验结果表明C16和C14有较强的抑制白色念珠菌生长的能力，而且HRP5与C16的抗白色念球菌的活性基本一致，而同样含有16个氨基酸的N16抗白色念珠菌的活性远远低于C16。这一结果提示HRP5的抗白色念珠菌的功能区位于羧基端。为了进一步研究HRP5的结构和功能的关系，许多学者通过残基替换得到了一系列的变异体，其中较重要的是dhvar1、dhvar2、dhvar4、dhvar5。它们是HRP5活性区(11-24位氨基酸)变异体。

发明内容

多肽或其药用盐，所述多肽具有如下氨基酸序列：

Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Leu-Xaa11-Lys-Tyr-Leu-Arg-Xaa16-Xaa17-Xaa18(SEQ ID NO：2)

其中Xaa1为Cys或缺失；

Xaa2为Lys、D-Lys、Arg、D-Arg、HoR或缺失；

Xaa3为Leu、Ile、Nle、Val、Trp、Phe、D-Phe、Thi或缺失；

Xaa4为Lys、D-Lys、Arg、D-Arg、Aib或HoR；

Xaa5为Lys、D-Lys、Arg、D-Arg或HoR；

Xaa6为Leu、Ile、Nle、Val、Trp、Phe、D-Phe或Thi；

Xaa7为Leu、Ile、Nle、Val、Trp、Phe、D-Phe或Thi；