[发明专利]一种牛支原体致弱菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物药物领域，具体涉及一株由牛支原体强毒株Mycoplasma bovis HB0801(MbovHB0801)体外传代致弱的弱毒菌株MbovHB0801-150.2，还涉及该致弱菌株在制备预防和控制由牛支原体所致疾病中的用途。

背景技术

牛支原体(Mycoplasma bovis)主要引起牛的肺炎、关节炎、乳房炎、角膜结膜炎等。该病原于1961年首次在美国患有乳房炎的病牛中分离到(Hale et al.，1962)。1976年牛支原体被描述为致呼吸道疾病的主要病因(Gourlay R N et al.，1976)，此后不同国家都有暴发流行，给养牛业造成了严重的经济损失。欧洲每年约有25％～33％的犊牛肺炎是由牛支原体引起的，相当于每年损失1.44～1.92亿欧元，其中英国每年就有190万头牛患牛支原体肺炎，死亡数达15.7万头。美国每年由于牛支原体导致的牛呼吸系统疾病和乳腺疾病所造成损失达1.40亿美元，单个牛场最高感染率达70％。我国于2008年首次报道牛支原体肺炎的流行(石磊等，2008)，此后发现该病在我国肉牛养殖为事普遍发生，造成了严重的经济损失。

虽然牛支原体自首次发现至今已有50年，但牛支原体所致疾病的防控手段仍处于初级阶段，疫苗研究尤其如此，目前还没有一种高效安全的疫苗用于牛支原体预防。但由于药物临床治疗效果差，疫苗研究一直受到重点关注。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种牛支原体致弱菌株，该牛支原体弱毒株对牛的致病力明显减弱，但保持良好的免疫原性。与现有的牛支原体灭活疫苗相比，该菌株具有制备方法简单、成本相对低、对动物体刺激性小和免疫效果好等优点。

本发明的另一个目的在于提供了一种牛支原体致弱菌株在制备预防和控制牛支原体所致疾病生物制剂的药物中的应用。

本发明的再一个目的在于提供了一种牛支原体致弱菌株MbovHB0801-150.2在制备治疗或预防牛肺炎的生物制剂的药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施：

将从临床分离的牛支原体强毒株MbovHB0801在体外液体培养基中高温条件下(41℃)连续传至150代，得到牛支原体致弱菌株MbovHB0801-150.2。

该牛支原体致弱菌株MbovHB0801-150.2的制备步骤是：

A.分离鉴定牛支原体强毒株：2008年，湖北省从外地引进肉牛中，陆续报道发生呼吸道疾病，牛群引进后不久即发病，表现为发热、咳嗽、流鼻涕，犊牛和体质弱的架子牛发病严重，死亡率可高达40％甚至更高，病后期可见关节炎和腹泻症状。剖检时，病理变化主要集中在胸腔，以化脓性或干酪样坏死性肺炎为主。胸腔内有浆液样积液，肺与胸膜可发生粘连，肺组织发生肉变，并分布大小不等的白色坏死灶，关节积液等(石磊等，2008)。通过病原分离培养、PCR检测与测序分析、动物回归试验等方法，确定其病原为牛支原体，命名为MbovHB0801。

B.牛支原体弱毒株MbovHB0801-150.2的培育：将本发明分离到的牛支原体(MbovHB0801株)在体外培养基中高温条件下(41℃)连续传至150代。

具体操作是：

①.将牛支原体MbovHB0801接种含有酚红的PPLO液体培养基，于41℃培养箱中培养2-3天后，培养基从红色变成透亮的黄色。

②.从上一代菌液取出1μL，接种新鲜PPLO培养基，于41℃恒温培养箱中培养2-3天后，再传下一代，直到150代。

C.动物试验表明，该代次牛支原体已充分致弱。通过形态学检测，纯粹性检测、特异性检测和外源细菌检测等试验结果验证了由牛支原体MbovHB0801培育的150代传代菌株MbovHB0801-150.2具有典型的牛支原体菌落特征，纯净无外源细菌污染。

D.该牛支原体致弱株MbovHB0801-150.2已提交认可的机构保藏，其保藏号是：CCTCC NO：M2011102；保藏时间：2011年3月31日；保藏单位是：中国典型培养物保藏中心；保藏地址：中国.武汉.武汉大学，分类命名：牛支原体MbovHB0801-150.2 Mycoplasma bovis MbovHB0801-150.2。

牛支原体致弱毒株MbovHB0801-150.2的具体特征如下：