[发明专利]一种生物法多级定向转化邻甲酚的方法有效
| 申请号： | 201110118355.7 | 申请日： | 2011-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN102226205A | 公开（公告）日： | 2011-10-26 |
| 发明（设计）人： | 曲媛媛;时胜男;张瑞杰;马桥;张旭旺;周集体;周豪;许炳雯;李新亮;孔春雷 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | C12P7/44 | 分类号： | C12P7/44;C12R1/19 |
| 代理公司： | 大连智慧专利事务所 21215 | 代理人： | 周志舰 |
| 地址： | 116024 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生物 多级 定向 转化 甲酚 方法 | ||
1.一种生物法多级定向转化邻甲酚的方法，其特征在于，采用苯酚羟化酶基因工程菌PH_IND全细胞，对邻甲酚进行第一级生物转化，得到的产物为3-甲基儿茶酚，再采用联苯外二醇双加氧酶基因工程菌BphC_LA-4全细胞，对3-甲基儿茶酚进行第二级生物转化；苯酚羟化酶基因工程菌PH_IND是通过获取中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心入册编号为CGMCC No.4763的高效苯酚降解菌Arthrobacter sp.W1中总长为5490bp、Genbank注册号为FJ610336的苯酚羟化酶基因全长序列，连接至载体质粒(pET28a(+)Vector)，并转化至宿主细胞大肠杆菌中构建的；联苯外二醇双加氧酶基因工程菌BphC_LA-4是通过获取中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心入册编号为CGMCC No.2723的高效联苯降解菌Dyella ginsengisoli LA-4中的联苯外二醇双加氧酶基因，连接至载体质粒(pET28a(+)Vector)，并转化至宿主细胞大肠杆菌中构建的；生物转化的反应液成分和含量及反应条件为：
第一级生物转化反应时，反应液中苯酚羟化酶基因工程菌PH_IND全细胞干重为20～40g/L，邻甲酚浓度为50～700mg/L，葡萄糖浓度为5～40mmol/L，在20～40℃温度下，控制摇床转速为50～200r/min，振荡反应时间为10～240min；第二级生物转化反应时，在第一级生物转化反应后的反应液中加入全细胞干重为20～40g/L的联苯外二醇双加氧酶基因工程菌BphC_LA-4，在20～40℃温度下，控制摇床转速为50～200r/min，振荡反应时间为5～50min。
2.如权利要求1所述的生物法多级定向转化邻甲酚的方法，其特征在于，生物转化的反应液成分和含量及反应条件为：第一级生物转化反应时，反应液中苯酚羟化酶基因工程菌PH_IND全细胞干重为35～40g/L，邻甲酚浓度为75～125mg/L，葡萄糖浓度为15～20mmol/L，在25～35℃温度下，控制摇床转速为100～180r/min，振荡反应时间为180～240min；第二级生物转化反应时，在第一级生物转化反应后的反应液中加入全细胞干重为30～35g/L的联苯外二醇双加氧酶基因工程菌BphC_LA-4，在25～35℃温度下，控制摇床转速为100～180r/min，振荡反应时间为30～40min。
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