[发明专利]一株阴沟肠杆菌及其在制备2，3-丁二醇中的应用

权利要求书

1.一株产2，3-丁二醇的阴沟肠杆菌溶解亚种，其特征在于：该菌株名为阴沟肠杆菌溶解亚种(Enterobacter cloacae subsp.dissolvens)SDM，菌株已于2010年10月19日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC No.4230。

2.权利要求1所述阴沟肠杆菌溶解亚种在制备2，3-丁二醇中的应用，其特征在于：由阴沟肠杆菌溶解亚种(Enterobacter cloacae subsp.dissolvens)SDM CGMCC No.4230发酵生产2，3-丁二醇；其中涉及的方法是：

斜面活化培养：将阴沟肠杆菌溶解亚种(Enterobacter cloacae subsp.dissolvens)SDMCGMCC No.4230菌种接种于斜面培养基，30～40℃条件下，静置培养10～14小时，备用；

摇瓶发酵种子培养：将上述培养的斜面菌株，在无菌条件下用接种环接1～2环于40～60mL液体种子培养基的300mL三角瓶中，置于转速为100～200rpm的摇床上，30～40℃培养10～16小时，得到种子培养液；

发酵罐发酵种子培养：

一级种子培养：将上述培养的斜面菌株，在无菌条件下用接种环接1～2环于80～120mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，置于转速为100～200rpm的摇床上，30～40℃培养10～16小时，得到一级种子培养液；

扩大培养：将上述培养的一级种子，在无菌条件下以体积比5～10％的接种量接种于0.8～1.2升液体种子培养基的5升三角瓶中，置于转速为100～200rpm的摇床上，30～40℃培养10～16小时，得到二级种子培养液；

发酵培养：

摇瓶发酵：以体积比5～10％的接种量，将种子液接种于装有80～120mL发酵培养基的500mL三角瓶瓶中，置于转速为100～200rpm的摇床上，30～40℃培养16～30小时，当发酵液中2，3-丁二醇浓度不再上升时，发酵停止；

50升发酵罐发酵：以体积比5～10％的接种量，将二级种子液接种于50升发酵罐中，发酵罐装液量为30升，然后以初始碳源浓度为60～120g/L、温度30～40℃、搅拌转速200～600rpm、通气量0.5～1.5vvm进行通风搅拌发酵培养，培养时间为20～60小时；发酵液初始pH值调至5.5～7.0，发酵过程中，通过流加3～6M的KOH和2～5M的H₃PO₄来调节pH值，使之控制在pH 5.5～6.5；发酵过程中，每隔3～5小时取样测定发酵液中的糖残量和2，3-丁二醇浓度，并依据底物的浓度流加底物，当发酵液中2，3-丁二醇浓度不再上升时，发酵结束；

其中：上述培养中涉及的培养基及配方是：

斜面培养基组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨4g/L，酵母膏4g/L，氯化钠2g/L，氯化钾2g/L，硫酸镁1.5g/L，琼脂粉18g/L，pH值调至5.5～7.0，蒸馏水配制，115℃灭菌20分钟；

种子培养基组成为：碳源30～40g/L，磷酸二氢钾3～10g/L，氯化铵3～12g/L，氯化钠1～4g/L，硫酸镁0.05～0.1g/L，硫酸亚铁0.05～0.1g/L，pH值调至5.5～7.0，蒸馏水配制，115℃灭菌20分钟； 

发酵培养基组成为：碳源60～120g/L，玉米浆干粉5～20g/L，磷酸二氢钾3～10g/L，氯化铵5～25g/L，乙酸钾1～4g/L，氯化钠1～4g/L，氯化钙0.05～0.1g/L，硫酸镁0.1～0.5g/L，硫酸锌0.2～0.6g/L，硫酸亚铁0.2～0.6g/L，pH值调至5.5～7.0，自来水配制，115℃灭菌20分钟。

3.如权利要求2所述阴沟肠杆菌溶解亚种在制备2，3-丁二醇中的应用，其特征在于：所述50升发酵罐发酵培养中流加方式为脉冲流加。

4.如权利要求3所述阴沟肠杆菌溶解亚种在制备2，3-丁二醇中的应用，其特征在于：所述脉冲流加的方式是当糖浓度降到10～30g/L时，脉冲流加底物，使糖浓度达到50～70g/L。

5.如权利要求2所述阴沟肠杆菌溶解亚种在制备2，3-丁二醇中的应用，其特征在于：所述种子培养基中的碳源至少含有葡萄糖或木糖。