[发明专利]一种产胆盐水解酶的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种产胆盐水解酶的基因工程菌，是将胆盐水解酶基因导入大肠杆菌得到的基因工程菌。

2.权利要求1所述基因工程菌，其特征在于，是将植物乳杆菌来源的胆盐水解酶基因连接到大肠杆菌表达载体pET 28a(+)并转化Escherichia coli BL21(DE3)得到的基因工程菌。

3.权利要求1或2所述基因工程菌，于2011年4月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M 2011115。

4.一种权利要求1所述基因工程菌的构建方法，包括如下步骤：

1)设计引物以CCTCC NO：M 2011116的基因组DNA为模板扩增出bsh基因；

2)将bsh基因连接到大肠杆菌表达载体pET28a(+)，得到重组载体pET28a(+)-bsh；

3)重组载体转化Escherichia coli BL21(DE3)得到基因工程菌CCTCC NO：M 2011115。

5.权利要求4所述方法，其特征在于，引物根据NCBI网站发表的Lactobacillus plantarum WCFS中胆盐水解酶的基因序列设计。

6.权利要求4或5所述方法，其特征在于，所述引物如下：

bsh1-F：5’-CGGGATCCATGTGTACTGCCATAACTTATCAATCTT-3’

bsh1-R：5’-CCCAAGCTTGTTAACTGCATAGTATTGTGCTTCTGAT-3’

7.权利要求1所述菌株生产胆盐水解酶的方法，其特征在于：

1)培养基：种子和斜面培养基为LB培养基(1L)：胰蛋白胨10g，酵母抽提物5g，NaCl 10g，用1N NaOH将pH调至7.0；斜面培养基添加琼脂15g；基本发酵培养基为TB培养基(1L)：去离子水900mL，胰蛋白胨12g，酵母抽提物24g，甘油10mL，高压灭菌，冷却至60℃，加100mL灭菌磷酸钾缓冲液；

2)培养方法：将20℃、200rpm下培养到OD₆₀₀在0.6～0.7之间的种子以2％的接种量转入基本发酵培养基，于20℃、200rpm条件下培养；

3)诱导条件：诱导OD值为0.6，重组菌在20℃诱导35小时，IPTG浓度为1.0mM。

8.权利要求1所述菌株在胆盐水解酶生产中的应用。