[发明专利]PEG修饰的重组人源过氧化氢酶的药物用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及PEG修饰的重组人源过氧化氢酶的药物用途，具体涉及制备治疗病毒、细菌引起的感染药物中的用途，尤其涉及PEG修饰的重组人源过氧化氢酶在制备治疗病毒、细菌及烧伤等感染引起的急性肺炎及烧伤感染药物中的用途。

背景技术

过氧化氢酶广泛存在于各种需氧生物和一些厌氧生物中，是体内过氧化酶体的组成之一和最标志性的酶，约占过氧化物酶体酶量的40%左右。有研究发现，过氧化氢酶特异高效地将过氧化氢分解成水和氧气。在正常的生理活动中，细胞有氧呼吸所消耗的O₂ 约10%被还原成H₂O₂，进而产生一系列活性氧自由基，而过氧化氢酶的正常生理功能就是清除体内生成的过氧化氢，并抑制过氧化氢向其他活性氧自由基转化。

正常状态下，体内活性氧生成和清除处在一个平衡的状态，而在病理状态下，机体氧化还原状态的平衡被打破，抗氧化体系受到抑制，导致机体内过量的活性氧自由基存在，进而引起机体的氧化损伤。有研究证实，在若干病理状态下，生物体内的过氧化氢酶含量均有所下降，如糖尿病人体内的过氧化氢酶含量显著低于正常人，阿尔茨海默病病人脑内的过氧化氢酶活力也受到抑制。还有研究表明在体外肿瘤模型中，过氧化氢酶活力的减弱是肿瘤发展进程中一个非常重要的因素。

目前，有关上述方面的研究已有不少报道，如：采用转基因的方法使小鼠线粒体过氧化氢酶高表达可延长小鼠生命，延缓心脏病和白内障的发生和发展，减轻氧化损伤。有研究认为诱导体内过氧化氢酶的表达可作为抗氧化治疗上的一个新的途径。有很多报导指出，外源性过氧化氢酶对疾病，尤其是氧化性疾病的进程有一定的缓解作用。研究结果证实，小鼠静脉注射外源过氧化氢酶极大地降低了过氧化氢诱导的脂质过氧化，维持血液循环的过氧化氢酶活性能抑制肺部肿瘤转移，高表达过氧化氢酶可使晶状体上皮细胞的抗氧化耐受性增强；所述的过氧化氢酶抑制了氧化性低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的人动脉平滑肌细胞增殖。上述报道均显示了过氧化氢酶在氧化损伤方面的研究方兴未艾。

发明内容

本发明的目的是提供PEG修饰的重组人源过氧化氢酶新的药物用途，涉及PEG修饰的重组人源过氧化氢酶在制备治疗病毒、细菌及烧伤等感染引起的急性肺炎及烧伤感染的药物中的用途。

具体而言，本发明的PEG修饰的重组人源过氧化氢酶的药物用途，其特征是将基因工程表达的人源过氧化氢酶用PEG修饰后，用于治疗由氧自由基（ROS）引起的氧化损伤性疾病；所述氧化损伤性疾病具体包括病毒、细菌及烧伤等感染引起的急性肺炎及烧伤感染。

本发明通过动物实验，结果显示，所述的PEG修饰的重组人源过氧化氢酶对病毒包括流感病毒、SARS病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒，细菌：包括金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、肺炎克雷博氏菌有明显的抑制作用。

本发明中，所述的PEG修饰的重组人源过氧化氢酶，为经PEG修饰、DNA序列为人源过氧化氢酶cDNA在毕赤酵母中表达并经纯化的产物；

所述的重组人源过氧化氢酶具有序列1的序列。

本发明的PEG修饰的重组人源过氧化氢酶通过下述方法制备：

将人源过氧化氢酶和活化的PEG 5000以一定的摩尔比投入到硼酸缓冲液， 4℃混合均匀后搅拌反应12h，每2h取样一次，检测混合物中的过氧化氢酶活力；反应完成后通过Sephacryl S-300 树脂柱，用20mmol/L的pH 7.0 的PBS洗脱，分别收集修饰和未修饰得组份，进行SDS-PAGE电泳分析；所述PEG修饰的人源过氧化氢酶透析后分装入灭菌的安培瓶，冷冻干燥,用0.05M的PBS缓冲液溶解，0.22um滤膜过滤。

本发明的PEG修饰的重组人源过氧化氢酶进行了抗氧化作用动物实验：

采用ICR小鼠(由上海伊莱克斯实验动物有限公司提供)，流感病毒感染引起机体一系列氧化损伤，通过鼻腔给与PEG修饰的重组人源过氧化氢酶,进行抗氧化试验，检测体重变化、死亡保护、局部病理切片，并进行抗氧化能力评价, 数据均采用SPSS15.0软件进行统计分析。

实验结果证实，所述的PEG修饰的重组人源过氧化氢酶，可有效对抗流感病毒H1N1、FM1导致的急性肺炎，使肺部病毒滴度减少、抗氧化能力和动物免疫保护增强、减缓急性肺炎的病理进程，从而使肺组织损伤减轻和小鼠体重下降，最终降低小鼠的死亡率，延长存活时间。