[发明专利]一种万能供肝的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于临床医学研究领域，具体涉及一种血型抗原为A型、B型、或AB型肝脏转变为O型万能供肝的制备方法。

背景技术

据世界卫生组织报告，目前全世界约有3．5亿人为乙肝肝炎病毒携带者，每年约有4500万人死于肝硬化，6000万人死于原发性肝癌。其中3000万为慢性肝炎、肝硬化、原发性肝癌，每年死于慢性肝病的就高达30万人。而盛行的酒文化和超负荷工作，催化剂般促进肝炎快速进展为爆发性肝功能衰竭或肝硬化、肝癌。

肝脏移植已成为公认的治疗终末期肝病的最有效治疗方法，因此近几年活体肝脏移植在国内几大肝脏移植中心获得了快速发展。活体肝脏移植的供体主要为配偶和兄弟姐妹，相对限制在有限的几位直系亲属，供受体之间ABO血型不相容就会经常出现。而在紧急或供肝紧缺的情况下, 需进行供受体ABO 血型不相容的肝脏移植，但其移植肝总5年生存率低于20％ ，而血型相符或相容的移植肝总5年生存率为68％（根据2006年UNOS数据库统计）。而围手术期死亡率在15%一45%之间，死因多为感染、超急性排斥反应、原发性肝脏无功能和肝动脉栓塞等，进而导致再次肝移植率高达36%。因此安全实施供受体ABO血型不相容的肝脏移植已成为全球肝脏移植专家的最关注问题之一。  

人类ABO血型抗原在肝脏主要表达于肝动脉、门静脉、胆管上皮以及肝窦内皮细胞。当血型不合的供肝植入患者体内后, 受体体内作为天然抗体的A、B 凝集素, 可直接与移植物血管内皮细胞、胆管上皮细胞上的抗原结合而形成抗原抗体复合物, 引起一系列抗体介导的排斥反应, 激活补体系统, 迅速破坏移植物内的血管网, 引起广泛血栓, 导致移植物失去功能。同时, 若受体的抗A、抗B、或抗AB抗体效价过高, 则可以出现超急性体液免疫反应的排斥损伤; 移植物中的A、B 抗原还可刺激受体引起溶血性贫血和血小板减少。因此供受体之间ABO血型相容或相符是实施肝脏移植的一个基本条件。

一系列措施已经被发展起来用于改善ABO血型不相容的肝脏移植术后的效果，如发展起来的术中加行脾脏切除，经门静脉、肝动脉灌注前列腺素E1和激素，血浆置换、特异性免疫吸附抗体，抗CD-20单克隆抗体美罗华（anti-CD20， rituximab）应用，使的ABO血型不相容的肝脏移植效果有了明显的改善，但仍普遍低于血型相合组，其移植肝总5年生存率低于20％ ，而血型相符或相容的移植肝总5年生存率为68％（根据最新UNOS数据库统计）。而围手术期死亡率在15%一45%之间，死因多为感染、超急性排斥反应、原发性肝脏无功能和肝动脉栓塞等，进而导致再次肝移植率高达36% ¹。日本京都大学移植中心是目前全世界最成功开展供受体间ABO血型不相容的肝脏移植，取得术后移植肝5年生存率为65％的可喜成果，但是与其移植中心ABO血型相符或相容的肝脏移植术后的5年生存率（76.9％）²仍有一定的差距。而应用抗CD-20单克隆抗体美罗华所引起的肺水肿、低氧血症和心肌梗塞等并发症，肝动脉插管引起的术后肝动脉大出血，门静脉插管引起的门静脉血栓，血浆置换须要大量的血浆和血液传播疾病的风险使的血型不相容的肝脏移植术后并发症明显增多，相应医疗费用明显增加。我科600百多例肝脏移植中，供受体ABO血型不相容的肝脏移植为8例，围手术期死亡率为50％³。因此改善供受体ABO血型不相容的肝脏移植疗效是移植外科医师的关注热点。

那如何解决临床肝脏移植实际中经常面对的ABO血型不相容难题呢？如果能把供肝血管内皮细胞、肝窦内皮细胞和胆管上皮细胞上的ABO血型抗原去除，成为O型供肝，也就是所谓的“万能供肝”，就将ABO血型不相容的肝脏移植转化为ABO 血型相容的肝脏移植，满足了肝脏作为移植免疫特惠器官要求的只要ABO血型相容的原则。

ABO 血型抗原的差异性是由红细胞膜表面的糖蛋白和糖脂上的寡糖链所决定的,而构成这些寡糖链的是少数暴露于红细胞表面的糖基。因此,是糖基的构成种类和顺序决定了红细胞表面是抗原A 或者抗原B。O型血糖分子结构链为：葡萄糖—半乳糖—N-乙酰半乳糖胺—半乳糖—岩藻糖；B型血糖分子结构链为：葡萄糖—半乳糖—N-乙酰半乳糖胺—半乳糖—岩藻糖—半乳糖；A型血糖分子结构链为：葡萄糖—半乳糖—N-乙酰半乳糖胺—半乳糖—N-乙酰半乳糖胺 ；AB型血糖分子结构链为：A型、B型两种结构兼有。 从这可以看出，其他血型与O型血的区别就在于多出了些“枝杈”如果剪掉这些“枝杈”所有的血就都就成O型血了。