[发明专利]一种修复锰污染土壤的方法

权利要求书

1.一种修复锰污染土壤的方法，在碱性锰矿尾渣堆放区种植美洲商陆，其特征是，播种时，先在种植坑内施入菌肥和混合肥料，混合均匀后再播撒美洲商陆种子，覆土浇水。

2.根据权利要求1所述的修复锰污染土壤的方法，其特征是，所述菌肥是通过对从蓖麻根际土壤中筛选获得的高抗锰菌株，进行生物发酵制作而成，其制作方法步骤如下：

（1）取蓖麻根际土样、水和数粒玻璃珠，加入已灭菌瓶中，置于转速为150 r/min、温度为27.5℃的摇床中振荡，取悬浮液做浓度梯度分别为10^-2、10^-3、10^-4、10^-5的菌悬液，吸取不同浓度的菌悬液于相应的马丁氏培养基中，用涂布棒涂布均匀，28℃培养箱中倒置培养；经72h培养后，观察培养基中微生物的生长情况；

（2）采用平板划线纯化法，选取单菌落接种于Mn²⁺浓度为5500mg/L的马丁氏固态培养基中，28℃培养箱中倒置培养，反复划线纯化直至获得纯菌株；

（3）将上述分离纯化得到菌株依次编号为1^#、2^#、3^#……，分批次接种于锰浓度梯度为11000mg/L、16500 mg/L、22000 mg/L、27500 mg/L、33000mg/L的液态培养基中， 置于温度为28℃、转速为150 r/min的摇床中培养，筛选出4^#菌为高抗锰的菌株；

（4）将PDA培养基分装于灭菌的试管中，灭菌后摆斜面，待斜面凝固后，无菌操作接种4^#菌种，于27.5℃温箱中培养，菌苔表面孢子生长丰满，呈灰绿色，并有露珠，即可取出备用；

（5）采用淀粉、葡萄糖、花生饼粉、蛋白胨、硫酸铵、硫酸镁、磷酸氢二钾和水配制培养基，用10%氢氧化钠调pH值7.2-7.4，用三个锥形瓶分装，高压灭菌，取出降温到40℃不烫手为止，接4^#菌种至摇床上振荡培养，直至菌丝形成，获得菌丝；

（6） 采用花生饼粉、蔗糖、硫酸铵、甘薯粉、玉米粉、蛋白胨、碳酸钙配制培养基，将发酵罐消毒灭菌，然后将培养基放入发酵罐，接入菌丝，连续搅拌，保持温度28℃，通气量体积比为1∶0.5，保证发酵罐各阀门严密；培养菌丝至成熟，菌丝体粗壮，菌液黏稠有泡沫；

（7）将稻谷皮、甘薯粉、麸皮、肥土、炉灰和黄豆饼粉进行灭菌，然后采用其中的两种或两种以上的原料配制固体吸附剂，放入采用甲醛和硫磺熏蒸灭菌过的培养室，然后接种菌丝，培养4-5天，35-45℃烘干，得菌粉，即菌肥。

3.根据权利要求2所述的修复锰污染土壤的方法，其特征在于：所述步骤（1）中的蓖麻根际土样为根周围2mm的土样；所述步骤（4）中的PDA培养基采用马铃薯200份、蔗糖20份，琼脂 20份和水1000份配制而成；所述步骤二（2）中的培养基采用淀粉2份、葡萄糖1份、花生饼粉2份、蛋白胨0.4份、硫酸铵0.25份、硫酸镁0.025份、磷酸氢二钾0.02份和水1000份配制而成；所述步（4）中的培养基采用花生饼粉3份、蔗糖份、硫酸铵0.25份、甘薯粉2份、玉米粉1份、蛋白胨0.1份和碳酸钙0.5份配制而成。

4.根据权利要求2所述的修复锰污染土壤的方法，其特征在于：所述步骤（7）中的固体吸附剂采用稻谷皮90份、甘薯粉10份配制而成。

5.根据权利要求2所述的修复锰污染土壤的方法，其特征在于：所述步骤（7）中的固体吸附剂采用麸皮10份、炉灰30份和肥土60份配制而成。

6.根据权利要求2所述的修复锰污染土壤的方法，其特征在于：所述步骤（7）中的固体吸附剂采用黄豆饼粉10份、肥土60份、炉灰20份和麸皮10份配制而成。

7.根据权利要求4或5或6所述的修复锰污染土壤的方法，其特征在于：所述稻谷皮、甘薯粉、黄豆饼粉、麸皮经121℃蒸汽灭菌1h；所述肥土、炉灰在烘炉上160℃灭菌1h。

8.根据权利要求4所述的修复锰污染土壤的方法，其特征在于：所述接种菌丝的重量为固体吸附剂的100%。

9.根据权利要求5或6所述的修复锰污染土壤的方法，其特征在于：所述接种菌丝的重量为固体吸附剂的40%。

10.根据权利要求1所述的修复锰污染土壤的方法，其特征是，所述混合肥料采用菜籽饼15份、动物粪便20份、稻田土40份、尿素5份、KH₂PO₄ 10份、(NH₄)₂SO₄ 12份、Ca(H₂PO₄)₂ 15份和CaSO4 10份配制而成。