[发明专利]人RBBP6基因的小干扰RNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及核酸技术领域，具体地说涉及RNA干扰技术，更具体地涉及具有抑制人RBBP6基因表达的小分子干扰核酸及其应用。

背景技术

RNA干扰是指由双链RNA诱发的基因沉默现象，主要通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。研究表明，长度为21-23nt的小RNA分子(small interfering RNA，siRNA)是引起RNA干扰的直接原因(Tuschl T，Zamore PD，Sharp PA，Bartel DP.RNAi：double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals.Cell 2000，101：25-33.)。RNA干扰在抑制基因表达方面具有高效性、简单性和特异性，目前在基因功能研究和疾病治疗中发挥了重要作用。近几年来，RNA干扰已经在肿瘤治疗方面取得了一些成果(Uprichard，Susan L.The therapeutic potential of RNA interference.FEBS Letters 2005，579：5996-6007)。

RBBP6，全称为Retinoblastoma binding protein 6，定位于人类染色体16p12.2。RBBP6基因编码的蛋白定位于细胞核内。由于氨基端含有保守的锌指结构域，RBBP6蛋白具有泛素酯酶活性，可促进Y-box结合蛋白(细胞周期正向调控因子)的降解(Scott RE，Giannakouros T，Gao S，Peidis P.Functional potential of P2P-R：a role in the cell cycle and cell differentiation related to its interactions with proteins that bind to matrix associated regionsof DNA？J Cell Biochem 2003；90：6-12；Chibi M，Meyer M，Skepu A，G Rees DJ，Moolman-Smook JC，Pugh DJ.RBBP6interacts with multifunctional protein YB-1through its RING finger domain，leading to ubiquitination and proteosomal degradation of YB-1.J Mol Biol 2008；384：908-16)。RBBP6可以与肿瘤抑制因子p53和/或Rb，以及核骨架附着区结合因子形成复合体，通过细胞周期和细胞分化依赖的形式影响基因转录、基因表达和对细胞核的调节(Scott RE，Giannakouros T，Gao S，Peidis P.Functional potential of P2P-R：a role in the cell cycle and cell differentiation related to its interactions with proteins that bind to matrix associated regions of DNA？J Cell Biochem 2003；90：6-12.；Li L，Deng B，Xing G，Teng Y，Tian C，Cheng X，Yin X，Yang J，Gao X，Zhu Y，Sun Q，Zhang L，Yang X，He F.PACT is a negative regulator of p53 and essential for cell growth and embryonic development.Proc Natl Acad Sci U S A 2007；104：7951-6；Scott RE，White-Grindley E，Ruley HE，Chesler EJ，Williams RW.P2P-R expression is genetically coregulated withcomponents of the translation machinery and with PUM2，a translational repressor that associates with the P2P-R mRNA.J Cell Physiol 2005；204：99-105)。RBBP6蛋白在食管癌组织中高水平表达(Yoshitake Y，Nakatsura T，Monji M，Senju S，Matsuyoshi H，Tsukamoto H，Hosaka S，Komori H，Fukuma D，Ikuta Y，Katagiri T，Furukawa Y，Ito H，Shinohara M，Nakamura Y，Nishimura Y.Proliferation potential-related protein，an ideal esophageal cancer antigen for immunotherapy，identified using complementary DNA microarray analysis.Clin Cancer Res 2004；10：6437-48)。过表达的RBBP6蛋白可诱导骨肉瘤Saos2细胞的细胞周期阻滞于有丝分裂的前中期，诱导细胞凋亡，并能增强乳腺癌MCF-7细胞对抗肿瘤药物喜树碱的化疗敏感性(Scott RE，Giannakouros T，Gao S，Peidis P.Functional potential of P2P-R：a role in the cell cycle and cell differentiation related to its interactions with proteins that bind to matrix associated regions of DNA？J Cell Biochem 2003；90：6-12；Scott RE，White-Grindley E，Ruley HE，Chesler EJ，Williams RW.P2P-R expression is genetically coregulated with components of the translation machinery and with PUM2，a translational repressor that associates with the P2P-R mRNA.J Cell Physiol2005；204：99-105；Gao S，Scott RE.P2P-R protein overexpression restricts mitotic progression at prometaphase and promotes mitotic apoptosis.J Cell Physiol 2002；193：199-207；Gao S，Scott RE.Stable overexpression of specific segments of the P2P-R protein in human MCF-7cells promotes camptothecin-induced apoptosis.J Cell Physiol2003；197：445-52；Scott RE，Gao S.P2P-R deficiency modifies nocodazoleinduced mitotic arrest and UV-induced apoptosis.Anticancer Res 2002，22：3837-42)。基于目前已有的关于RBBP6基因在食管癌、骨肉瘤和乳腺癌的报道，可以推测RBBP6作为一个癌基因在肿瘤发生和进展过程中具有重要的功能，并有望成为抗肿瘤治疗的有效靶点。