[发明专利]一种药用植物短葶山麦冬分子的检测引物及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药用植物短葶山麦冬分子的检测引物及其检测方法。属于药材种质的品质鉴定技术领域。

背景技术

短葶山麦冬(Liriope Muscari(Decn.)Bailey)为百合科植物山麦冬属植物，以干燥块根入药。1995年《中国药典》以“山麦冬”之名收载至今，具有养阴生津、润肺清心的功效，用于肺燥干咳、虚劳咳嗽、津伤口渴、心烦失眠、肠燥便秘等症。现代药理研究表明，短葶山麦冬药材中含有甾体皂苷类、多糖类等成分，有改善心血管、免疫调节、呼吸系统调节的功能，可降低血糖、抗肿瘤、抗炎、抗心律失常及抗疲劳等。

据查，沿阶草属18种(变种)和山麦冬属8种(变种)中有16种具块根并有价值，极易混淆。中药材鉴别通常采用基源植物形态、药材性状、显微和理化等方法，存在一定弊端。麦冬类药材，其植株形态类型丰富，种属界限不十分明晰，依据形态学分类方法鉴定有争议。L.Muscari种内表型性状变化很大，有主要用于观赏的阔叶山麦冬，有主要药用的短葶山麦冬。分子生物学研究也表明其种内存在较高的遗传多样性。短葶山麦冬又以福建泉州和莆田两地区产药材最为道地。所以为保证用药安全，对短葶山麦冬进行有效鉴别显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种药用植物短葶山麦冬分子的检测引物及其检测方法。本发明检测方法能够快速准确地判断样品是否为药用植物短葶山麦冬分子，具有能快速有效的鉴别短葶山麦冬及其混淆种和种内变异的特点。

为了达成上述目的，本发明的解决方案是：

一种药用植物短葶山麦冬分子的检测引物，包括用于扩增叶绿体trnL-F序列的一对PCR反应检测引物和用于扩增核糖体ITS序列的一对PCR反应检测引物，所述的反应引物均由正反向引物组成，其中用于扩增叶绿体trnL-F序列的一对PCR反应检测引物的DNA序列为：

SEQ ID No.1：5’-CGAAATCGGTAGACGCTACG-3’；

SEQ ID No.2：5’-ATTTGAACTGGTGACACGAG-3’；

用于扩增核糖体ITS序列的一对PCR反应检测引物的DNA序列为：SEQ IDNo.3：5’-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3’；

SEQ ID No.4：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’。

一种药用植物短葶山麦冬分子的检测方法，其特征在于包括如下步骤：短葶山麦冬叶片采集、利用现有的改良CTAB法提取基因组DNA，包括短葶山麦冬的TrnL-F特征DNA序列和ITS特征DNA序列；然后分别以短葶山麦冬的TrnL-F特征DNA序列和ITS特征DNA序列为模板，利用上述引物，分别进行PCR扩增，反应结束后用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，根据扩增DNA片段的位置判定结果，当扩增trnL-F序列时扩增出一条明亮清晰的400bp条带；在扩增ITS序列时则为一条690bp条带时就鉴定为药用植物短葶山麦冬。

所述的PCR反应体系为：

PCR反应体系总体积25μL，(以下试剂均购自生工生物工程(上海)有限公司)

10×buffer                        2.5μL；

MgCl₂(25mmol/L)                   1.5μL；

dNTP mixture(10mmol/L)        0.5μL；

引物(10μmol/L)               各1.5μL；

DNA模板(10mg/L)               5.0μL；

Taq DNA酶(5U/μL)             0.3μL；

灭菌重蒸水                    12.2μL。

所述的PCR反应程序为：95℃预变性4min，95℃变性50sec，50℃退火50sec，72℃延伸90sec，共35个循环，72℃延伸7min，4℃保温。

本发明的有益效果为：本发明检测方法能够快速准确地判断样品是否为药用植物短葶山麦冬分子，其结果不受环境影响，结果重复性和准确性都较高，可为其原植物鉴别提供分子依据，具有能快速有效的鉴别短葶山麦冬及其混淆种和种内变异的特点。

具体实施方式

实施例1