[发明专利]一种霍山石斛水溶性提取物的制备方法有效
申请号: | 201110121785.4 | 申请日: | 2011-05-12 |
公开(公告)号: | CN102229677A | 公开(公告)日: | 2011-11-02 |
发明(设计)人: | 朱慧秋 | 申请(专利权)人: | 芜湖华信生物药业股份有限公司 |
主分类号: | C08B37/00 | 分类号: | C08B37/00 |
代理公司: | 合肥金安专利事务所 34114 | 代理人: | 金惠贞 |
地址: | 241006 安徽省*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 霍山 石斛 水溶性 提取物 制备 方法 | ||
1.一种霍山石斛水溶性提取物的制备方法,其特征在于包括以下操作步骤:
(1)、预处理:取霍山石斛或霍山石斛组织培养物,粉碎;将粉碎的霍山石斛或霍山石斛组织培养物用有机溶剂回流2~3次,于温度30~50℃放置6~10小时,使有机溶剂挥发、去除,得到霍山石斛药渣;
(2)、加压浸提:取霍山石斛药渣,放入提取浓缩机组中,按料液质量比1︰5~1︰25加入蒸馏水,于温度50~70℃、压力0.04~0.08Mpa条件下提取2~3次,每次0.5~1小时;将每次提取结束得到的提取液打入浓缩釜中,浓缩到浓缩液体积与霍山石斛药渣质量的比例为1毫升: 2~5克,得到霍山石斛浓缩液;
(3)、醇沉:取霍山石斛浓缩液,加入乙醇,使乙醇体积百分数达到70~80%,温度4-10℃静置24~48小时,于温度4℃、转速10000 r/min条件下离心10分钟,沉淀物即为霍山石斛沉淀物;
(4)、温度控制脱蛋白:取霍山石斛沉淀物溶于蒸馏水中,沉淀物和蒸馏水的质量体积比为1: 4~6,得到霍山石斛提取物溶液;霍山石斛提取物溶液在温度100℃条件下脱蛋白5分钟,于温度4℃、转速10000 r/min离心10分钟,除去蛋白,收集离心上清液;
(5)、超滤浓缩:取所述离心上清液,用截留分子量为2000~5000 Da的超滤膜浓缩,同时除单糖及寡糖等小分子杂质,收集浓缩液A;
(6)、纯化:将浓缩液A通过高效阴离子DEAE-纤维素-52交换树脂柱,用蒽酮比色法跟踪检测流出液,收集去离子水洗脱部分的主峰流出液;主峰流出液用截留分子量为2000~5000 Da的超滤膜浓缩,同时除单糖及寡糖等小分子杂质,收集浓缩液B;将浓缩液B通过生物凝胶聚丙烯酰胺葡聚糖-200色谱柱,用蒽酮比色法跟踪检测流出液,收集去离子水洗脱部分的主峰流出液;主峰流出液用截留分子量为2000~5000 Da的超滤膜浓缩,同时除单糖及寡糖等小分子杂质,收集浓缩液C;
(7)、干燥:将浓缩液C冷冻干燥,即得到霍山石斛提取物。
2.根据权利要求1所述的霍山石斛水溶性提取物的制备方法,其特征在于:所述霍山石斛为新鲜或干燥的市售霍山石斛试管苗或市售霍山石斛人工栽培苗。
3.根据权利要求1所述的霍山石斛水溶性提取物的制备方法,其特征在于:所述霍山石斛组织培养物是通过以下方法获得的:取霍山石斛原球茎5克,接种于装有50毫升MS固体培养基的三角瓶中,在温度为25℃、光照时间为12h/d、光照强度为3000勒克斯的条件下培养35天收获,用蒸馏水冲洗2次,滤纸吸干其表面的水分即得霍山石斛组织培养物。
4.根据权利要求1所述的霍山石斛水溶性提取物的制备方法,其特征在于:所述有机溶剂为石油醚或丙酮或乙酸乙酯。
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