[发明专利]一种非洲菊灰霉病抗性鉴定的方法

权利要求书

1.一种非洲菊灰霉病抗性鉴定的方法，按以下步骤进行：

（1）适宜的接种材料的选择，以新鲜采集的完整幼叶或花瓣作为接种材料；

（2）灰霉菌Botrytis cinerea培养及其分生孢子悬浮液的制备

用马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养灰霉菌，将-70～-80℃低温保存的灰霉菌于超菌工作台接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，于18℃～25℃温度，光照强度为1000～2000lx条件下16 h连续光照培养培养3天后，转入黑暗条件培养7～15天，菌丝长满整个培养皿后，用含有质量分数为0.1%吐温-20的灭菌蒸馏水悬浮培养皿中所培养的分生孢子，用小孔计数法制备每毫升孢子数为1×10⁷个的分生孢子贮备液供接种用；

（3）制备接种液

于接种前，将步骤（2）获得的分生孢子贮备液稀释为含有质量分数为3%的马铃薯葡萄糖和分生孢子数为1×10⁶个/ml浓度的接种液供接种用或将步骤（2）获得的分生孢子贮备液稀释为含有质量分数为6%的马铃薯葡萄糖和分生孢子数为3×10⁵个/ml浓度的接种液供接种用；

（4）接种

用微量移液器取2μl的接种液以液滴的方式将孢子液接种到步骤（1）所述的幼叶或花瓣，将该幼叶或花瓣材料保持在相对湿度为90%～95%、光照强度为1000lx～2000lx、温度为18℃～25℃的条件下, 接种24h后开始观察病情发展，根据病情发展的速度及病情指数判断供试材料的抗性, 花瓣在48h内病情指数达到3～5级为感病品种，幼叶在120h内病情指数达到3～5级为感病品种。

2.根据权利要求1所述的一种非洲菊灰霉病抗性鉴定的方法，其特征在于：所述的病情指数分为花瓣病情指数统计方法和幼叶病情指数统计方法，所述的花瓣病情指数统计方法如下：

0级：接种液滴清澈，无任何侵染迹象，

1级：开始侵染，侵染斑限于接种液滴之内，液滴呈褐色状，

2级：侵染扩展到液滴之外，侵染斑大小为液滴的2-4倍，

3级：侵染区域继续扩大，但小于接种花瓣的1/2面积，

4级：侵染面积超过花瓣的1/2，

5级：整个花瓣几乎或完全被侵染，

48h内病情指数达到3～5级为感病品种；

所述的幼叶病情指数统计方法如下：

0级：接种液滴清澈，无任何侵染迹象，

1级：开始侵染，侵染斑限于接种液滴之内，液滴呈褐色状，

2级：侵染扩展到液滴之外，侵染斑大小为液滴的2-5倍，

3级：侵染区域继续扩大，侵染斑大小为液滴的6-10倍，

4级：侵染区域继续扩大，侵染区域接近叶片面积的1/2，

5级：侵染区域达到或超过叶片面积的2/3，

120h内病情指数达到3～5级为感病品种。

3.根据权利要求1所述的一种非洲菊灰霉病抗性鉴定的方法，其特征在于：所述的接种是对完整幼叶的正面接种或对花瓣的正面接种。