[发明专利]一种判断关于大鼠脊髓颈段前角运动神经元分布的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学领域，具体涉及一种判断关于大鼠脊髓颈段前角运动神经元分布的方法。

背景技术

各种关于大鼠中枢神经系统的图谱，如George paxinos的《大鼠脑立体定位图谱》对于脊髓部分的描述比较粗略，也没有对于前角运动神经元详细的划分。

判断关于大鼠脊髓颈段前角运动神经元分布的方法，现有技术中还没有较好的相关方法。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种判断关于大鼠脊髓颈段前角运动神经元分布的方法，解决了现有技术中大鼠脊髓颈段前角运动神经元分布的研究较粗略的问题。

本发明的判断关于大鼠脊髓颈段前角运动神经元分布的方法，其特征在于，具体步骤为：

步骤1)备材准备若干只SD大鼠；

步骤2)灌注、固定和取材将SD大鼠，腹腔注射麻醉后左心室穿刺、灌注、固定；取出保留有脊神经根的脊髓，固定12小时后，取出脊髓分段切开，放入20％的蔗糖中过夜；

步骤3)切片、染色、图象分析用滤纸吸掉脊髓上的蔗糖，包埋后用冰冻切片机进行冠状位切片，厚度为40μm，取其中几只SD大鼠的颈段脊髓连续切片，余下的SD大鼠的颈段脊髓每隔10张切片取2张，分两组贴片；晾干后两组切片分别用焦油紫染色法和Pal-Weigert染色法染色；神经元的Nissl体呈紫红色或紫色着色，在显微镜下观察颈段脊髓前角的运动神经元的分布，用形态学图形分析系统进行摄像，然后根据细胞的大小、形态和分布特征来划分前角运动神经元的核团分布来进行读片。

优选的，所述SD大鼠体重为230-250g。

有益效果：经本发明的判断关于大鼠脊髓颈段前角运动神经元分布的方法，细化了SD大鼠脊髓中各神经核团出现和终止的节段到1/4节段，显示在相同的节段出现不同的神经核团是可能的，对研究不同的神经和脊髓灰质中神经核团的联系的定位也提供比较明确的参考。

具体实施方式

实施例1

本发明的判断关于大鼠脊髓颈段前角运动神经元分布的方法，具体步骤如下：

步骤1)准备实验动物

成年SD大鼠12只，体重230-250g，清洁级，由苏州大学实验动物中心供应。

步骤2)灌注、固定和取材取230±20g成年SD大鼠12只(雄性8只，雌性4只)，腹腔注射麻醉后左心室穿刺、灌注、固定。取出保留有脊神经根的脊髓，后固定12小时后，取出脊髓分段切开，放入20％的蔗糖中过夜。

步骤3)切片、染色、图象分析用滤纸吸掉脊髓上的蔗糖，包埋，LEICA冰冻切片机冠状位切片，切片厚度40μm，取其中2只SD大鼠的颈段脊髓连续切片，余10只SD大鼠的颈段脊髓每隔10张切片取2张，分两组贴片，晾干后两组切片分别用焦油紫染色法和Pal-Weigert染色法染色。神经元的Nissl体呈紫红色或紫色着色。在OlympusCX31显微镜下观察颈段脊髓前角的运动神经元的分布，用由江苏省捷达科技发展有限公司生产的捷达801形态学图形分析系统进行摄像、观察后根据细胞的大小、形态和分布特征来划分前角运动神经元的核团分布来进行读片。

结果显示：在脊髓的颈段C1-C4起始处前角的神经元可以分为两群，内侧群和外侧群，分别为后内侧核和前外侧核，在前角的内侧，靠近基地部区域有一神经元组成的核团称之为连合核。在连合核的中间和背侧的区域有一较大的核团，称之为中间背侧核。连合核起于C1在3/4C2处达到最大，又慢慢变小终于1/2C6起始处。中间背侧核起始于C1在3/4C2处达到最大，又慢慢变小终于C5起始处。大鼠脊髓颈段前角在C4起始处渐渐变膨大。前角神经元分为三组：前核、后内侧核、前外侧核。在C5节段大鼠前角的膨大更加突出并且向腹外侧伸出，神经元数量增多，出现了前内侧核。在1/2C5(前角处可见后外侧核，前角膨大明显神经元数量进一步增加。在1/2C6出现了后外侧后核。大鼠颈段脊髓前角在C7处膨大最明显，达到最大。从T1开始前角运动神经元的数量开始减少，核团逐渐的消失。在3/4T1后外侧后核渐渐消失；1/4T1前核和前角后外侧后核消失；1/2T1后外侧核，前内侧核消失。

结果显示：前内侧核和后外侧核和Rexed划分的腹内侧核和腹外侧核相对应，见于颈段脊髓的全长。腹外侧核在大鼠脊髓并没有消失只是在颈膨大处位置变化了，前外侧核就是腹外侧核。

此外，本发明的显微观察细化了SD大鼠脊髓中各神经核团出现和终止的节段到1/4节段。提示在相同的节段出现不同的神经核团是可能的。对研究不同的神经和脊髓灰质中神经核团的联系的定位也提供比较明确的参考。

上述实施例只是为了说明本发明的技术构思及特点，其目的是在于让本领域内的普通技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡是根据本发明内容的实质所作出的等效的变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。