[发明专利]绵羊BMPR-1B基因A746G多态性检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因分析检测产品，更具体的说是适用于绵羊BMPR-1B基因A746G多态性检测试剂盒及检测方法。

背景技术

基因芯片是近几年在高科技领域内出现的最具时代特征的重大科技进展之一。它是将能反映样本中大量基因信息的基因探针(寡核苷酸探针、cDNA克隆、PCR产物等)，有序固定在固相支持物(如醛基、氨基、巯基、羧基等活性基团修饰的载玻片或硅片、尼龙膜、硝酸纤维素膜)上形成阵列，通过与实际样本(或扩增产物)进行杂交反应，只需一次实验，就可高通量获得所有待检基因的信息。这种平行检测、高信息通量的特点使其在基因表达、基因多态性检测等方面的应用受到广泛重视。

绵羊多胎性状是绵羊业多产，高产的基础。绵羊的多胎性状已经引起国际动物遗传育种界的普遍重视。对于绵羊多胎基因突变位点的检测国内外也做了大量的工作，多采用检测单个碱基的差异（或突变）来标示其多态性，该工作重复劳动多，消耗高，自动化程度低，该手段目前已经不适应大规模、低消耗和自动化的要求，应用基因芯片方法检测可以克服这些不足，而且随着芯片技术的发展，其检测速度、特异性和敏感性也不断提高，尤其是第三代遗传标记单核苷酸多态（SNP）的出现，使得可以更方便快捷地应用基因芯片进行大规模多态性检测。

研究表明，BMPR-1B基因A746G为控制绵羊多胎性状的基因位点。

绵羊是季节性发情的动物，排卵率和产羔率低，反映绵羊繁殖力的主要指标产羔数的遗传力平均仅为0.10左右。但是有些品种的绵羊却有很高的排卵率，通过研究发现，BMPR-1B基因为中国美利奴羊、小尾寒羊、湖羊等绵羊品种的高繁殖率和高产羔数主效基因，由于BMPR-1B基因B等位基因在绵羊群体中存在，使得这些羊群的繁殖率比较高。即BMPR-1B基因的不同基因型能够决定绵羊的产羔数。BMPR-1B基因在中国美利奴羊群中存在3种基因型，分别为AA、AB、BB三种基因型，三种基因型的存在是由于BMPR-1B基因在746位点处A-G的碱基置换所致。其中其效应表现为：BB突变型即：BMPR-1B基因746位双链的A碱基均置换为G碱基，所述BB突变型绵羊平均排卵数增加3枚，每只母羊平均每胎能多产1.5只羔羊，一胎可以产3-5只羔羊；AB杂合型即：BMPR-1B基因746位点处一条链的A碱基置换为G碱基，所述AB杂合型羊与地方品种羊相比，平均排卵数增加1.5枚，每只母羊平均每胎能多产1.0只羔羊，一胎可以产2-3只羔羊；AA野生型即：BMPR-1B基因746位点处的碱基均没有发生突变，所述AA野生型羊产羔数与地方品种羊接近，一胎可以产1-2只羔羊。因此，通过对母羊BMPR-1B基因的检测，开展BMPR-1B基因标记辅助选择，组建BB基因型绵羊群体，是快速提高绵羊繁殖力的一个有效方法，能够使群体平均产羔数达到230%以上，极大的增加羔羊数量，增加养羊的经济效益。

前期研究表明：小尾寒羊大部分为BMPR-1B基因突变纯合子，湖羊全部为BMPR-1B基因突变纯合子，而湖羊的杂交后代以杂合子AB为主。而在中国美利奴羊群体中存在BMPR-1B基因的三种基因型。

目前，针对BMPR-1B基因的检测，大多数研究人员采用PCR-RFLP技术，而PCR-RFLP技术存在检测速度慢，不能适应在绵羊群体中开展大规模、并行的检测目的基因的要求。而利用基因芯片技术高通量地检测绵羊BMPR-1B-746的基因型，将可以为畜牧业育种提供一种准确、快速、价廉的基因检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度高、操作简便、准确率高，可有效提高工作效率、经济实用的适用于检测绵羊BMPR-1B基因A746G多态性的试剂盒以及提供一种可规模检测、简便实用、大大提高工作效率的检测方法。

本发明公开了一种绵羊BMPR-1B基因A746G多态性检测试剂盒，其特征在于该试剂盒主要包括下列扩增液、至少1张基因芯片、杂交缓冲液Ⅰ和Ⅱ、预杂交液、Taq酶、杂交显色试剂；

所述的扩增液中的每种扩增液中分别包含以下系列下游引物SP1-SP12之一和公用上游引物QP：