[发明专利]鲨鱼皮胶原蛋白制备的抗氧化多肽

权利要求书

1.一种抗氧化多肽，其特征在于：所述抗氧化多肽的氨基酸序列为Gly-Ala-Ile-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Arg-Ala。

2.一种抗氧化多肽的制备方法，其特征在于：以鲨鱼皮为原料提取胶原蛋白，然后采用酸性蛋白酶对其进行酶解，分离纯化、冷冻干燥得到抗氧化多肽；所述酶解条件为：pH为3.0、温度50℃、酶解时间为5h、酶-底物配比为3000U/g；所述酶为酸性蛋白酶。

3.根据权利要求2所述的抗氧化多肽的制备方法，其特征在于：所述分离纯化的手段包括超滤、SP-Sephadex C-25离子交换色谱、Sephadex G-50分子筛和RP-HPLC反相高效液相色谱。

4.根据权利3要求所述的抗氧化多肽的制备方法，其特征在于：所述分离纯化的具体步骤为：（1）酶解产物首先利用分子量截留范围为8000Da和3500Da的超滤膜对酶解产物进行超滤分离，将其分为3个分子量范围不同的组分，分别为分子量大于8000Da的组分、分子量介于3500Da和8000Da的组分、分子量小于3500Da的组分；（2）收集具有最佳抗氧化活性的组分，再用SP-Sephadex C-25阳离子交换色谱进行分离，上样后洗去未吸附组分，再以含0～0.35mol/L NaCl的0.02mol/L、pH4.0乙酸-乙酸钠缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为0.5ml/min，在225nm下进行测量，测定各吸收峰对应的洗脱组分的抗氧化活性；（3）收集具有最佳抗氧化活性的峰，再用Sephadex G-50凝胶色谱进行分离，洗脱液为去离子水，流速为0.5ml/min，在225nm下进行测量，测定各吸收峰对应的洗脱组分的抗氧化活性；（4）收集具有最佳抗氧化活性的峰，再利RP-HPLC反相高效液相色谱进行进一步的分离，反相HPLC的分离以含0.1%（体积）三氟乙酸的浓度梯度为5%～40%的乙腈溶液作为洗脱液进行线性洗脱，所用色谱柱为Gemini 5μ C18，上样量为100μL，流速为1mL/min，检测波长为215nm，测定各吸收峰对应的洗脱液的抗氧化活性，收集得到抗氧化活性最高的三个组分；（5）利用RP-HPLC反相高效液相色谱对三个组分进行鉴定，以含10mM乙酸铵的浓度梯度为5%～27.5%的乙腈溶液作为洗脱液进行线性洗脱，所用色谱柱为Gemini 5μ C18，上样量为20μL，流速为1ml/min，检测波长为215nm，三个组分均分别分离得到单一的峰，即得到三个纯的活性组分；利用蛋白质固相序列分析仪鉴定三个肽的氨基酸序列，得到如权利要求1所述的抗氧化多肽的氨基酸序列为：Gly-Ala-Ile-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Arg-Ala。