[发明专利]一种拟穴青蟹抗菌肽Sphistin及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及甲壳类动物基因工程技术领域，特别涉及一种拟穴青蟹抗菌肽Sphistin及其应用。

背景技术

近年来，随着世界人口的快速增长，以及人们对水产品消费水平的提高，水产业得到迅速发展，但是高密度养殖却引起水产动物病害的频繁发生，有些病害甚至对水产业造成毁灭性打击。在对病害防治途径的探索中，传统抗生素引起致病菌的抗药性和对环境的负面作用，使其面临严重挑战，其应用越来越受到限制。由于抗菌肽具有特异杀灭病原微生物，不会使病原菌产生抗药性，也不会污染环境等优点，因而越来越受到人们的重视，在水产养殖动物病害防治中展现出重要应用潜力。

抗菌肽是动物免疫防御系统产生的一类对外源性致病微生物具有免疫活性的多肽物质，是动物非特异性免疫防御系统的一个重要组成部分。从1981年开始，人们相继从细菌、真菌、两栖类、昆虫、高等植物、哺乳动物乃至人类中发现并分离获得具有抗菌活性的多肽。抗菌肽作为新型杀菌物质的突出特点是分子量小，活性强，功能广泛，具有广谱杀菌作用。抗菌肽可组成性表达，如人的β防御素1(Human beta defensins，HBD)；亦可在创伤或感染后诱导表达，如LL237，HBD22，HBD23，HBD24等。已经发现的大多数抗菌肽对革兰氏阳性菌有较强的杀灭作用，有的则对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都有作用。随着人们研究工作的深入开展，发现某些抗细菌肽对部分真菌、原虫、病毒及癌细胞等均具有强有力的杀伤作用。某些抗菌肽甚至有抗病毒活性，如抗人类HIV病毒、抗沙眼衣原体病毒等，能破坏肿瘤细胞的细胞膜并选择性地杀伤肿瘤细胞。

组蛋白histone是存在于真核细胞核内的一类碱性蛋白质。易溶于水和稀酸，在稀氨水中沉淀。含精氨酸和赖氨酸比例很高，在细胞核中与脱氧核糖核酸紧密结合，形成球形的核小体结构，是染色质的基本结构。维持其特定的立体结构，使大量遗传信息压缩在细胞核内。1958年小牛胸腺组蛋白的抗菌活性首次得到证实(1、Hirsch JG.Bactericidal action of histone.JExp Med 1958；108：925-944.)，Buforin I是第一个报道的源于Histone2A的抗菌肽(2、Park CB，Kim MS，Kim SC.A novel antimicrobial peptide from Bufo bufo gargarizans.Biochem Biophy ResComm 1996；218：408-413)，近年来多种物种体内源于Histone2A的抗菌肽已被报道，如鲶鱼、虾、贝类、鲍鱼(3、Park IY，Park CB，Kim MS，Kim SC.Parasin I，an antimicrobial peptide derivedfrom histone H2A in the catfish Parasilurus asotus.FEBS Lett 1998；437：258-262；4、Patat SA，Carnegie RB，Kingsbury C，Gross PS，Chapman R，Schey KL.Antimicrobial activity of histonesfrom hemocytes of the pacific white shrimp.Eur J Biochem 2004；271：4825-4833；5、Li C，Song L，Zhao J，Zhu L，Zou H，Zhang H，et al.Preliminary study ona potential antibacterial peptide derivedfrom histone H2A in hemocytes of scallop Chlamys farreri.Fish Shellfish Immunol2007；22：663-672.)。组蛋白的乙酰化和甲基化等翻译后修饰大部分发生在其N端，本发明根据拟穴青蟹Histone 2A序列，合成了拟穴青蟹组蛋白Histone 2AN端前38个氨基酸，发现其是一种具有广谱抗细菌、抗酵母的抗菌肽，命名为Sphistin。本发明为拟穴青蟹体内源于Histone2A的抗菌肽的首次报道。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种拟穴青蟹抗菌肽Sphistin及其制备方法。

本发明的第二目的在于提供一种拟穴青蟹抗菌肽Sphistin在制备抗菌剂中的应用。

本发明的第二目的在于提供一种拟穴青蟹抗菌肽Sphistin在制备饲料添加剂中的应用。

所述拟穴青蟹抗菌肽Sphistin的氨基酸序列为：