[发明专利]一种检测血中GCDCS和GCDCA的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学和医学领域，是一种快速定量检测血中3-硫酸甘氨鹅脱氧胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCS和GCDCA)的试剂盒，对人血液进行超高效液相色谱质谱联用分析，以快速定量测定血中GCDCS和GCDCA的浓度，用于肝癌的辅助诊断。 

背景技术

肝癌是常见的恶性肿瘤之一在恶性肿瘤死亡率中仅次于胃癌和食道癌而居第三位。肝癌主要和肝炎病毒感染以及肝硬化等疾病相关。肝癌的早期症状经常不明显，多数病人无症状，体检亦缺乏肿瘤本身的体征。因此肝癌发现时，患者大多已进入中晚期，这一阶段肝癌缺乏有效治疗手段。因此，肝癌的早期诊断非常重要，可使肝癌的五年生存率显著性提高。随着分子生物学的不断发展，多种新型标志物不断发现，有望提高肝癌的早期诊断率，改善治疗效果。 

目前最常用的临床肝癌血清标志物为甲胎蛋白(AFP)。然而AFP血清水平在诊断肝癌时存在敏感性和特异性较低的缺点，单独用于确诊时的检出率一般只有50％-75％左右，对早期肝癌的诊断率更低。 

胆汁酸是由肝实质细胞在线粒体中以胆固醇为原料直接合成的存在于胆汁中的一大类胆烷酸的总称。胆汁酸一直被认为仅具有促进脂类的消化和吸收、维持胆汁酸分泌的动态平衡、抑制胆固醇在胆汁中析出沉淀而形成胆结石以及在病毒性肝炎和胆道堵塞等疾病中辅助诊断等生理功能。近年来，胆汁酸越来越引起人们的重视，其被认 为是一种多功能的重要信号分子，在能量动态平衡(文献1：Watanabe，M.；Houten，S.M.；Mataki，C.；Christoffolete，M.A.；Kim，B.W.；Sato，H.；Messaddeq，N.；Harney，J.W.；Ezaki，O.；Kodama，T.；Schoonjans，K.；Bianco，A.C.；Auwerx，J.Nature 2006，439，484-489.文献2：Baxter，J.D.；Webb，P.Nature 2006，439，402-403.)、磷脂代谢(文献3：Martin，F.P.J.；Dumas，M.E.；Wang，Y.L.；Legido-Quigley，C.；Yap，I.K.S.；Tang，H.R.；Zirah，S.；Murphy，G.M.；Cloarec，O.；Lindon，J.C.；Sprenger，N.；Fay，L.B.；Kochhar，S.；van Bladeren，P.；Holmes，E.；Nicholson，J.K.Molecular Systems Biology 2007，3，16.文献4：Bilz，S.；Samuel，V.；Morino，K.；Savage，D.；Choi，C.S.；Shulman，G.I.American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism 2006，290，E716-E722.)、糖代谢(文献5：Nguyen，A.；Bouscarel，B.Cellular Signalling 2008，20，2180-2197.文献6：Brinton，E.A.Diabetes Obesity&Metabolism 2008，10，1004-1011.)以及细胞增殖或凋亡(文献7：Metalli，V.D.；Mancino，M.G.；Mancino，A.；Torrice，A.；Gatto，M.；Attili，A.F.；Alpini，G.；Alvaro，D.Digestive and Liver Disease 2007，39，654-662文献8：Ramalho，R.M.；Viana，R.J.S.；Low，W.C.；Steer，C.J.；Rodrigues，C.M.P.Trends in Molecular Medicine 2008，14，54-62.)等整合调节中起重要调节作用。 

我们通过代谢组学研究，基于超高效液相色谱-质谱分析平台分离检测健康妇女、良性肝病和肝癌病人血清中的代谢物小分子，利用统计学手段分析比对三组人群的代谢差异，发现在血清中3-硫酸甘氨鹅脱氧胆酸和它的前体甘氨鹅脱氧胆酸的比值跟肝癌有关(专利申请号：201010175559.5)。 

目前尚无文献报道高效定量检测人体内的3-硫酸甘氨鹅脱氧胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸的方法。 

本发明提供了一种用于快速定量检测血中3-硫酸甘氨鹅脱氧胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸的试剂盒，该试剂盒对样品无需复杂的预处理过程，而且定量准确、重复性好、稳定性高。 

发明内容