[发明专利]利用akirin2基因序列制备鸡基因工程免疫增强剂的方法

权利要求书

1.利用akirin2基因序列制备鸡基因工程免疫增强剂的方法，其特征在于利用akirin2基因序列制备鸡基因工程免疫增强剂的方法按以下步骤进行：

一、利用NCBI中红原鸡的EST数据库，以人的akirin2基因编码序列为靶标，利用BLAST软件进行电子克隆，获得鸡akirin2基因全长编码序列；

二、采用Trizol试剂提取3日龄雏鸡骨骼肌的总RNA，采用二步法RT-PCR技术获得鸡akirin2基因全长编码序列，经纯化后克隆到载体pMD18-T并测序鉴定，获得含鸡akirin2基因的重组pMD18-T载体；

三、根据鸡akirin2基因全长编码序列，设计引物P1和P2，并使引物P1和P2的5′-端分别带有HindIII和EcoRI酶切位点，然后将重组pMD18-T载体中的鸡akirin2基因亚克隆到表达载体pcDNA3.0中构建成重组表达载体pcDNA-akirin；

四、采用0.1mol/L的无菌PBS缓冲液稀释重组表达载体pcDNA-akirin至浓度为1.0μg/μl，于-20℃保存，即完成利用akirin2基因序列制备鸡基因工程免疫增强剂；

其中步骤二中鸡akirin2基因全长编码序列如SEQ ID No.1所示；

步骤三中引物P1的核苷酸序列为：5′-CCCAAGCTTATGGCGTGCGGCGCCACTTTG-3′，引物P2的核苷酸序列为：5′-CGGAATTCTCATGAAACGTAACTGGCAGG-3′；

步骤四中PBS缓冲液：NaCl 137mmol/L、KCl 2.7mmol/L、Na₂HPO₄10mmol/L、KH₂PO₄2mmol/L，pH为7.2。

2.根据权利要求1所述的利用akirin2基因序列制备鸡基因工程免疫增强剂的方法，其特征在于步骤二中3日龄雏鸡为商品海兰褐鸡。