[发明专利]蛋白酶变体

权利要求书

1.RP-II蛋白酶变体，其包含与离子结合位点相距10或更小，优选地6或更小距离位置上的氨基酸残基的至少一种修饰。

2.权利要求1的变体，其中在至少一个如下的位置上进行修饰：1、2、3、4、5、6、7、8、143、144、145、146、158、159、160、161、162、194、199、200和201，优选地在位置2、3、4、5、6、7、144、159、160和161上进行修饰，尤其是BLC(SEQ ID NO：2)中D7E和D7Q的修饰，其中的位置是指BLC或对应的位置。

3.权利要求1或2的变体，其中的修饰包括用中性或带负电荷的残基取代带正电荷的氨基酸残基，或者用带负电荷的残基取代中性残基，或者缺失带正电荷的或中性残基。

4.权利要求1的变体，其中通过至少一个与BLC位置144和/或161相对应的位置上的修饰除去离子结合位点，尤其是BLC(SEQ ID NO：2)中H144R和/或D161R，K+H144Q，N的修饰。

5.RP-II蛋白酶变体，其包含高度活动区域中氨基酸残基的至少一种修饰，所述区域处于至少一个与BLC的如下位置相对应的位置中：26-31(26、27、28、29、30和31)、89-91(89、90和91)、216-221(216、217、218、219、220和221)。

6.权利要求5的变体，其中亲本是BLC，而修饰包括G30A和/或G91A。

7.RP-II蛋白酶变体，其包含在活动区域中进行的至少一种修饰，所述区域处于至少一个与BLC的如下位置相对应的位置中：51-56(51、52、53、54、55、56)、88-94(88、89、90、91、92、93、94)、118-122(118、119、120、121、122)和173-183(173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183)，优选地在区域51-56和118-122中。

8.RP-II蛋白酶变体，具有至少一个通过将BLC位置128和145或对应位置上的氨基酸残基修饰为Cys所提供的二硫桥，优选地是BLC或对应位置上的S 145C和T128C取代。

9.RP-II蛋白酶变体，与亲本RP-II蛋白酶相比具有修饰的表面电荷分布，其包含至少一个与BLC的如下位置相对应位置上的修饰：7、17、95、109、143、174、209、216，尤其是BLC(SEQ ID NO.1)如下的修饰：

D7N，S，T

Y17R，K，H

Y95R，K，H

T109R，K，H

Q143R，K，H

Q174R，K，H

E209Q，N

N216R，K，H。

10.RP-II蛋白酶变体，与亲本RP-II蛋白酶相比显示改良的稳定性，其包含至少一个与BLC的位置18、115、185、269和293相对应位置上的Pro取代，尤其是BLC(SEQ ID NO.1)如下取代中的一个或多个：T60P、S221P、G193P、V194P。

11.RP-II蛋白酶变体，其包含与活性位点残基相距小于10与BLC的如下位置相对应位置上的氨基酸残基上的修饰：1、8、22-35(22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35)、42-58(42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58)、82-100(82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100)、129-135(129、130、131、132、133、134、135)、141-142、153-156(153、154、155、156)、158、161-171(161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171)、188-193(188、189、190、191、192、193)、195、201-207(201、202、203、204、205、206、207)、210、213-214、217。