[发明专利]用于发酵生产L-缬氨酸的重组DNA、菌株及方法

权利要求书

1.用于发酵生产L-缬氨酸的重组DNA，其特征在于：该重组DNA包括解除了三种支链氨基酸对乙酰羟酸合成酶的反馈抑制的编码乙酰羟酸合成酶的DNA序列、编码二羟基还原异构酶的DNA序列以及编码支链氨基酸转氨酶的DNA序列。

2.如权利要求1所述的用于发酵生产L-缬氨酸的重组DNA，其特征在于：

所述解除了三种支链氨基酸对乙酰羟酸合成酶的反馈抑制的乙酰羟酸合成酶从N端开始计算，该乙酰羟酸合成酶催化亚基的第30位的赖氨酸突变为谷氨酰胺，第156位的天冬酰胺突变为天冬氨酸，第233位的缬氨酸突变为异亮氨酸，其序列见SEQ ID NO：10，且该乙酰羟酸合成酶调节亚基的20位的甘氨酸突变为天冬氨酸，21位的异亮氨酸突变为天冬氨酸，22位的异亮氨酸突变为苯丙氨酸，42位的丙氨酸突变为缬氨酸，47位的组氨酸突变为亮氨酸，其序列见SEQ ID NO：11；

所述二羟基还原异构酶是来源于棒杆菌或短杆菌的二羟基还原异构酶，其具有与SEQ ID NO：12实质相同的氨基酸序列；

所述支链氨基酸转氨酶是来源于棒杆菌或短杆菌的支链氨基酸转氨酶，其具有与SEQ ID NO：14实质相同的氨基酸序列。

3.一种棒杆菌或短杆菌，其特征在于，它包含如权利要求1所述的重组DNA。

4.根据权利要求3所述的棒杆菌或短杆菌，其特征在于，该棒杆菌或短杆菌是导入如权利要求1所述重组DNA而转化过的。

5.如权利要求3所述棒杆菌或短杆菌在发酵生产L-缬氨酸工艺中的应用。

6.一种生产L-缬氨酸的方法，其特征在于，该方法为：在发酵培养基中对如权利要求3所述的黄色短杆菌进行培养，生产L-缬氨酸，所述培养温度在31℃～40℃。

7.根据权利要求6所述的生产L-缬氨酸的方法，其特征在于，所述培养温度为31℃，培养时间72h。

8.根据权利要求6所述的生产L-缬氨酸的方法，其特征在于，所述培养温度为34℃～40℃，培养时间48h。